Отбор клинического материала осуществляет медицинский персонал с соблюдением правил противоэпидемического режима, только стерильными одноразовыми инструментариями (шприцы, соответствующие зонды, цитощеточки и пр.), в одноразовых перчатках.
Максимально полно собрать материал из выбранного локуса, используя подходящие для этого аппликаторы – зонды, цитощетки (обеспечить адекватность клинического образца).
Сохранить полученный материал (ДНК/РНК микроорганизмов), используя надежные транспортные среды и консерванты, предоставляемые ПЦР-лабораторией. Среда для транспортировки и хранения клинического материала обеспечивает стабильность РНК и ДНК при комнатной температуре до 28 дней.
Поместить взятый материал в вакуэты с ЭДТА (кровь), в одноразовые химически чистые пробирки «Эппендорф» (мазки, ликвор, биоптат и др.). Основным условием при сборе материала является предотвращение попадания в пробу ДНК-аз и рибонуклеаз, т.к. рибонуклеазы и ДНК-азы – ферменты деградации РНК и ДНК. Они чрезвычайно стабильны в окружающей среде, выдерживают длительное кипячение. Основной источник нуклеаз – кожные покровы, частицы пыли. Пластиковые пробирки и наконечники должны иметь маркировку «DNase, RNase- free» (свободные от нуклеаз).
Сразу после забора плотно закрывать пробирки, флаконы с клиническим материалом, не касаясь их внутренней поверхности и внутренней поверхности крышек.
При работе с клиническим материалом, открывая пробирки, флаконы, не производить резких движений и не допускать разбрызгивания и расплескивания, что может привести к контаминации проб и рабочих поверхностей.
Для исключения взаимной контаминации образцы хранить и транспортировать в отдельном полиэтиленовом пакете или штативах. При необходимости переноса образца использовать автоматические микропипетки со сменными одноразовыми наконечниками с аэрозольными барьерами.
До транспортировки в ПЦР-лабораторию отобранный биоматериал хранить при температуре 2–4 °С не более 48 часов. Необходимо минимизировать время от забора образца до постановки ПЦР-анализа. Транспортировка образцов осуществляется в сумках-холодильниках, термоконтейнерах, термосах с термопакетами, льдом или сухим льдом.
Кровь, плазма, сыворотка
Забор крови рекомендуется проводить с использованием вакуумных систем. Внедрение таких систем позволяет стандартизировать манипуляции с кровью, положительно сказывается на всех этапах лабораторного исследования и в целом переводит работу лаборатории на иной, более высокий уровень качества. Их использование гарантирует защиту персонала от инфицирования, сокращается время, затрачиваемое на процедуру забора крови, значительно реже сопровождается гемолизом, позволяет сохранить стерильность проб крови и герметично транспортировать.
Венепункцию рекомендуется выполнять натощак из локтевой вены в специальную вакуумную пробирку с антикоагулянтом, после чего пробирка переворачивается для перемешивания несколько раз. Пробирки с кровью хранят в холодильнике при +4 °С – +8 °С. Максимальный срок хранения крови – 1 сутки (не замораживать!). В случае необходимости длительного хранения необходимо отобрать 1 мл сыворотки или плазмы крови и хранить ее при температуре -16 о -20 о С не более 2 недель.
Характеристика вакуумных систем, используемых для ПЦР-диагностики:
Вакуэты с ЭДТА (6 %) – используются для проведения качественных и количественных исследований. ЭДТА-антикоагулянт хорошо фиксирует нуклеиновые кислоты клетки.
Вакуэты с цитратом натрия (3,8 %) – используются для проведения качественных и количественных исследований. Не подходят для длительной транспортировки, т.к. цитрат является хорошей питательной средой для посторонней микрофлоры.
Вакуэты без антикоагулянтов (сыворотка крови) – используются для проведения качественных исследований. Использования сыворотки крови для количественных исследований нежелательно, т.к. часть инфекционного агента оседает в сгустке крови, при этом снижается возможность определения количественного содержания его в крови.
Вакуэты с гепарином - категорически не подходят для ПЦР - реакции. Гепарин является полианионом, как и ДНК, поэтому в ПЦР-реакции конкурирует с ДНК.
Правила забора крови на определение мутаций в генах человека ПЦР диагностику
Кровь на ПЦР диагностику . Забор крови производится натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в одноразовый шприц объемом 2-5 мл и переносится в пробирку с ЭДТА или специальную вакуумную систему типа “Veccuette” (с ЭДТА с сиреневой крышкой), пробирка закрывается пробкой и переворачивается несколько раз (для перемешивания с антикоагулянтом).
Пробирка с кровью до исследования хранят в холодильнике при +4°С — +8°С. Максимальный срок хранения: Кровь, собранная в пробирку с ЭДТА, для определения мутаций в генах BRCA1/2, может храниться при +4°С — +8°С 2 дня.
Правила забора крови на определение ПЦР – исследований инфекций
Для получения плазмы забор крови производят натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовой иглой (диаметр 0,8-1, 1 мм) в специальную вакуумную систему (сиреневые крышки – 6% ЭДТА). Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом (в противном случае кровь свернется, и выделение ДНК/РНК станет невозможным).
Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя!
Условия хранения и перевозки материала и предварительно обработанных проб
Образцы цельной крови: -при температуре 20-25ºС – в течение 2 часов; -при температуре 2-8ºС – в течение 6 часов с момента взятия материала для количественного определения нуклеиновых кислот; в течение 12 ч – для качественного определения нуклеиновых кислот;
Недопустимо замораживание образцов цельной крови!
Забор материала на ПЦР ВПЧ инфекций
Для исследования на ВПЧ необходимо достаточное количество эпителиальных клеток, т.к. вирус является внутриклеточным агентом. Допустимо умеренное присутствие примесей в виде цервикальной слизи и крови. В ряде случаев возможно взятие материала с помощью универсального гинекологического зонда, однако при этом объем соскобного отделяемого будет меньше, а количество клеток может быть недостаточным.
Удаляют слизь и отделяемое влагалища с поверхности шейки матки стерильным марлевым тампоном, вводят рабочую часть цитощетки в цервикальный канал и делают два-три полных оборота по часовой стрелке. Извлекают цитощетку и помещают ее рабочую часть, содержащую взятый материал, в пробирку с транспортной средой. Рабочую часть цитощетки обламывают не более 1 см пластиковой основы цитощетки и оставляют в пробирке с транспортной средой.
В случае невозможности обломить рабочую часть цитощетки или универсального зонда, следует максимально полно смыть клинический материал с их рабочей части в пробирку с транспортной средой, прижав ее к внутренней стороне пробирки и вращая по 5-10 раз по часовой и против часовой стрелки.
Недопустимо использование многоразовых ножниц для обрезания рабочей части цитощетки или универсального зонда – это может привести к перекрестной контаминации клиническим материалом и, как следствие, получению ложно-положительных результатов.
Пробирки с биологическим материалом до исследования хранят в морозилке при -16°С.
Забор материала на ПЦР диагностику у мужчин
Соскоб (мазок). Забор материала производится универсальным зондом из уретры. При необходимости материал для исследования берется из генитальных язв (исследование на HSV-II). Рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал, отрезается или обламывается и помещается в одноразовую пробирку типа “Эппендорф” с консервирующим раствором либо тщательно перемешивается вращательным движением, остатки жидкости на зонде отжать о стенки пробирки, зонд извлечь (выбросить в контейнер с дезинфицирующим раствором).
Пробирки с биологическим материалом до исследования хранят в морозилке при -18°С.
Сперма. Собирают в одноразовую сухую пробирку типа «Эппендорф». Максимальный срок хранения 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С — +8°С; при -18°С — -20°С не более 2-х недель.
Сок предстательной железы . После окончания массажа предстательной железы сок в количестве 0,5-1 мл собирают в одноразовую сухую пробирку типа “Эппендорф”. При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи (в которой содержится сок предстательной железы) в количестве 10 мл.
Максимальный срок хранения 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С — +8°С; при -18°С — -20°С не более 2-х недель.
Кафедра клинической лабораторной диагностики с курсом ФПК и ПК
Перечень разделов по дисциплине клиническая лабораторная диагностика для подготовки к выполнению аудиторных контрольных работ в зимнюю лабораторно-экзаменационную сессию студентами 6 курса заочной формы обучения.
1. Организационная структура клинико-диагностической лаборатории.
2. Общеклинические лабораторные исследования.
3. Гематологические лабораторные исследования.
4. Лабораторные методы оценки гемостаза.
5. Биохимические лабораторные исследования.
6. Контроль качества лабораторных исследований.
Перечень контрольных вопросов по дисциплине клиническая лабораторная диагностика для подготовки к выполнению аудиторных контрольных работ в зимнюю лабораторно-экзаменационную сессию студентами 6 курса заочной формы обучения.
Структурная организация клинико-диагностической лаборатории.
Нормативные документы и приказы МЗ РБ, регламентирующие работу клинико-диагностической лаборатории.
Оборудование клинико-диагностической лаборатории.
Основная измерительная и аналитическая аппаратура клинико-диагностической лаборатории.
Основы техники безопасности и правила санэпидрежима при работе в клинико-диагностической лаборатории.
Правила взятия, доставки, приема, оформления и регистрации биологического материала.
Общеклинические лабораторные исследования.
Подготовка пациента к исследованию, сбор, хранение и обработка материала для общего анализа мочи.
Физические свойства мочи: цвет, прозрачность, запах, рН, относительная плотность мочи.
Химические свойства мочи, методы определения общего белка (качественный и количественный методы, методы «сухой химии»).
Определение глюкозы в моче при помощи индикаторной бумаги и глюкозооксидазным методом.
Правила приготовления нативного препарата мочевого осадка.
Количественное определение элементов организованного осадка мочи.
Определение элементов неорганизованного осадка.
Виды неорганизованных осадков.
Общий клинический анализ крови.
Характеристика методов определения СОЭ, концентрации гемоглобина, подсчета количества эритроцитов, цветового показателя, лейкоцитов и лейкоцитарной формулы.
Правила подготовки пациента, забор, хранение и обработка материала для общего клинического анализа крови.
Нормальные значения и пределы физиологических колебаний уровня эритроцитов и лейкоцитов периферической крови.
Правила приготовления препарата и подсчета в камере Горяева.
Метод определения гемоглобина крови гемоглобинцианидным методом.
Современное представление о костно-мозговом кроветворении.
Процентное содержание лейкоцитов в периферической крови. Диагностическое значение лейкоцитарной формулы.
Лабораторные исследования, характеризующие свертывающую систему крови.
Понятие о системе свертывания крови.
Первичный гемостаз. Лабораторные методы исследования первичного гемостаза.
Фазы коагуляционного гемостаза.
Фибринолиз.
Антикоагулянтная система.
Лабораторные методы оценки вторичного гемостаза.
Лабораторные исследования, характеризующие биохимические показатели крови.
Лабораторные показатели, характеризующие белковый обмен. Определение общего белка в сыворотке крови биуретовым методом.
Остаточный азот и его компоненты. Методы определения мочевины, креатинина, мочевой кислоты.
Методы исследования ферментов. Клинико-диагностическое значение определения активности ферментов.
Биологическая роль углеводов. Определение содержания глюкозы ферментативным методом.
Липопротеины плазмы крови. Лабораторные показатели липидного обмена.
Образование и метаболизм желчных пигментов. Клинико-диагностическое значение исследования показателей пигментного обмена.
Аналитическая надежность и контроль качества клинических лабораторных исследований.
Аналитическая оценка лабораторных результатов. Виды ошибок, их характеристика.
Внутрилабораторный контроль качества. Методы контроля воспроизводимости результатов исследования. Контроль правильности результатов исследования.
C оставление аналитического лабораторного заключения.
Аналитическое лабораторное заключение составляется по условиям ситуационной задачи.
На основании их анализа предложенных лабораторных данных необходимо ответить на следующие вопросы:
Принцип, лежащий в основе анализируемого метода;
Необходимое оборудование;
Правила подготовки исследуемого материала и основные источники ошибок возможных при выполнении данного метода;
Единицы измерения;
Понятие о референтных значениях. Клинико-диагностическое значение анализируемого метода.
Практические навыки:
Организация рабочего места для выполнения лабораторных исследований;
Приготовление реагентов в необходимой концентрации;
Прием, маркировка и хранение биологического материала;
Выполнение общего анализа крови;
Выполнение общего анализа мочи;
Выполнение гемостазиологического исследования;
Выполнение биохимических исследований;
Оформение результатов лабораторных исследований;
Инструкция по сбору, хранению и транспортировке
биологического материала для лабораторных исследований
Биологический материал должен находиться в маркированных пробирках (контейнерах) и сопровождаться заполненным индивидуальным направлением в одном экземпляре. Необходимо тщательно, разборчиво заполнить направление, указав следующие сведения: дату, № пробирки, наименование ЛПУ, направившего на исследование биоматериал, фамилию врача, забравшего материал; ФИО, возраст и пол пациента, предварительный диагноз; при беременности – срок беременности. Прием биологического материала: ПЦР и иммунохимические исследования крови - с 09:00 до 18:00 кроме выходных и праздничных дней. Бактериологические исследования - с 09:00 до 11:00 кроме пятницы, выходных, предпраздничных и праздничных дней. |
для выявления возбудителей заболеваний методом ПЦР
1.1.1. Взятие биоматериала производится из предполагаемого места обитания микроорганизмов и развития инфекции.
1.1.2. Количество забранного материала должно быть небольшим. Избыток отделяемого, слизь и гной отрицательно влияют на качество выделения ДНК и способствуют деградации ДНК при хранении и транспортировке.
1.1.3. При внесении биоматериала, взятого у пациента зондом с ватным тампоном или щеточкой, в пробирку типа эппендорф с буферным раствором, необходимо:
Соблюдать стерильность;
Прежде, чем погружать собранный на тампоне (щеточке) биоматериал в раствор, размазать его по сухой стенке пробирки, затем смочить тампон (щеточку) в растворе и, вращая зонд, тщательно смыть весь материал со стенки пробирки и тампона (щеточки);
По возможности отжать тампон о стенку пробирки, удалить зонд с тампоном (щеточкой) и закрыть пробирку.
1.2. Способы взятия биоматериала для исследований методом ПЦР
1.2.1. Соскобы. Для соскобов используются одноразовые стерильные зонды, имеющие ватный тампон с повышенной адсорбцией или «щеточки», реже - ложки Фолькмана, малые ушные ложки или аналогичные инструменты со слегка затупленными краями. Поскабливающими движениями собрать материал. Исследуемый материал должен содержать возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи, примесей крови и экссудата. Внести материал в стерильную пробирку типа эппендорф с буферным раствором (см. раздел 1.1.).
Соскоб из цервикального канала: перед взятием соскоба необходимо удалить избыток слизи стерильным ватным тампоном, обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором. Зонд ввести в цервикальный канал на глубину 0,5-1,5 см, избегая соприкосновения со стенками влагалища, и поскабливающим движением (не до крови) собрать материал. Небольшое количество эритроцитов в пробе не влияет на результат анализа. При наличии эрозии шейки матки материал берут с границы здоровой и измененной ткани.
Соскоб из уретры: зонд ввести в уретру (у мужчин - на глубину 2-4 см) и несколькими вращательными движениями собрать материал. Накануне перед взятием материала допускается провокация (острая пища, алкоголь и др.). Рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1-2-х часов перед взятием пробы. При наличии обильных гнойных выделений соскоб надо брать не позже, чем через 15 минут после мочеиспускания.
Соскоб с конъюнктивы берут, предварительно проведя анестезию глаза 0,5% раствором дикаина. Вывернув веко, зондом с ватным тампоном (либо глазным скальпелем) собрать эпителиальные клетки с конъюнктивы.
Соскоб из прямой кишки: зонд ввести в анальное отверстие на глубину 3-4 см и вращательным движением собрать материал.
1.2.2. Мазки. Одноразовым стерильным зондом с ватным тампоном или щеточкой взять небольшое количество отделяемого (со сводов влагалища, из зева, носоглотки и др.) и перенести в стерильную пробирку типа эппендорф с буферным раствором (см. раздел 1.1.).
1.2.3. Кровь. Для исследований методом ПЦР кровь должна быть нативной (не свернувшейся).
Кровь собрать асептически, путем венопункции - в фирменную пробирку (2-3 мл) с антикоагулянтом ЭДТА (гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя! ), аккуратно перемешать, плавно переворачивая пробирку.
Кровь с ЭДТА является биоматериалом для следующих групп исследований:
- генетические исследования (момент забора крови значения не имеет).
- выявление возбудителей инфекций (наиболее информативными являются пробы, взятые при ознобе, повышенной температуре, т. е. предположительно во время виремии или бактериемии).
1.2.4. Моча. В пустой стерильный контейнер с плотно завинчивающейся крышкой собирают утреннюю первую или среднюю порцию мочи в количестве минимум 10 мл. Если забор мочи проводят днем, то перед этим пациент не должен мочиться 1,5-3 часа.
1.2.5. Мокрота. Утром провести санацию ротовой полости и горла (прополоскать раствором питьевой соды). Собрать мокроту в пустой стерильный широкогорлый флакон.
1.2.6. Биоптат. Взятие материала осуществлять из зоны предполагаемого местонахождения возбудителя инфекции, из поврежденной ткани или пограничного с повреждением участка. Поместить биоптат в стерильную пробирку типа эппендорф с буферным раствором.
1.2.7. Слюна, желудочный сок, ликвор, синовиальная жидкость. Слюна (1-5 мл), желудочный сок (1-5 мл), ликвор (1-1,5 мл) - поместить в пустую стерильную пробирку (контейнер).
1.2.8. Сок предстательной железы. После массажа предстательной железы сок собирают в количестве 0,5-1 мл в пустую стерильную пробирку (контейнер). При невозможности получить сок, сразу после массажа собирают первую порцию мочи в количестве не более 10 мл (в этой порции содержится сок предстательной железы).
1.2.9. Смывы, бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ). Стерильным ватным тампоном и 5-7 мл физиологического раствора проводят смыв, например, с наконечника эндоскопа или бронхоскопа, и помещают 0,5-5 мл смыва в пустую стерильную пробирку (контейнер).
1.2.10. Фекалии. Зонд с ватным тампоном помещают внутрь каловых масс и слегка проворачивают, захватывая небольшое количество материала. Затем материал помещают в стерильную пробирку типа эппендорф с буферным раствором.
1.3. Правила хранения биологического материала для исследований методом ПЦР
1.3.1. Мазки, соскобы :
В холодильной камере (+4ºС - +8ºС) до 7-и суток;
В морозильной камере (-20ºС) до 14 суток (допускается только однократное размораживание!).
1.3.2. Моча : в холодильной камере (+4ºС - +8ºС) не более 1-х суток;
1.3.3. Кровь с ЭДТА : в холодильной камере (+4ºС - +8ºС) - для определения возбудителей инфекций - не более 1-х суток; для генетических исследований – до 4-х суток. Замораживанию не подлежит.
1.3.4. Мокрота
1.3.5. Биоптаты :
В холодильной камере (+4ºС - +8ºС) не более 1-х суток,
В морозильной камере (-20ºС) до 2-х недель.
1.3.6. Сок предстательной железы : в холодильной камере (+4ºС - +8ºС) не более 1-х суток.
1.3.7. Синовиальная жидкость : в холодильной камере (+4ºС - +8ºС) не более 1-х суток.
2. Правила взятия, хранения и транспортировки крови
для иммунохимических исследований
2.1.1. Накануне взятия крови исключить физические нагрузки, стрессовые ситуации, физиотерапевтические процедуры, прием лекарственных средств (за исключением случаев медикаментозного лечения по назначению врача), оральных контрацептивов, прием спиртных напитков и жирной пищи. Непосредственно перед исследованием не курить.
2.1.2. При исследовании функции щитовидной железы в период лечения препаратами, содержащими гормоны ЩЖ, исследование проводится через 24 ч. после последнего приема препарата; за 2-3 дня до взятия крови исключить прием препаратов, содержащих йод.
2.1.3. При исследовании ПСА за неделю до анализа исключить любые манипуляции с предстательной железой.
2.1.4. Взятие крови производят утром, натощак (во избежание хилёзности, т. е. мутности сыворотки), в условиях физиологического покоя. Перед забором крови пациенту необходимо предоставить 15-минутный отдых.
2.1.5. Взятие крови осуществляют в процедурном кабинете ЛПУ, в положении пациента «сидя» или «лёжа», из локтевой вены с соблюдением правил асептики и антисептики . Кровь собирают в стерильную пробирку, шприц-моновет или cистему для взятия крови (Vacutainer®, Vacuette®).
2.1.6. Для получения сыворотки венозная кровь отстаивается до полного свертывания. После образования фибринового сгустка последний отделяют от стенок стерильной стеклянной палочкой, строго индивидуальной для каждой пробы, пробирку центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин* .
* Шприц-моновет и cистемы для взятия крови (Vacutainer®, Vacuette®) подвергаются центрифугированию без предварительных манипуляций.
2.1.7. Надосадочную жидкость желтого цвета (сыворотку) осторожно переносят пипеткой в пустую пробирку с крышкой (на 5 мл).
2.2. Правила хранения крови и сыворотки крови для иммунохимических исследований
2.2.1. К ровь: в холодильной камере (+40С - +80С) в течение 1-х суток.
2.2.2. Сыворотка крови:
В холодильной камере при температуре +40С - + 80С в течение 4-х суток;
В морозильной камере при температуре -200С в течение 2-х недель.
Допускается только однократное размораживание!
ВНИМАНИЕ! Исследованию подлежит сыворотка, не содержащая примеси эритроцитов, бактериальных проростов, хилёза, гемолиза. При наличии любого из указанных признаков сыворотка уничтожается и назначается повторное взятие крови.
2.3. Правила взятия и хранения крови для исследования волчаночного антикоагулянта
и коагулогических исследований
2.3.1. Взятие крови производится утром натощак из локтевой вены с соблюдением правил асептики и антисептики в день выполнения исследования. Для предотвращения активации свертывания крови компрессия вены не должна превышать 1 минуту.
2.3.2. Если исследование назначается на фоне приема препаратов, влияющих на свертывание крови, необходимо отметить это в направлении.
2.3.3. Кровь собирают в специальную пробирку, содержащую цитрат натрия , до отметки. При несоблюдении этого правила изменяется соотношение кровь/антикоагулянт, что может отрицательно сказаться на точности результата.
2.3.4. В течение 1 ч. после взятия крови пробирку необходимо отцентрифугировать при 3000 об/мин в течение 15 минут.
2.3.5. Хранение плазмы: до 6 часов при температуре +40С - +80С или до 2-х недель при температуре -200С.
2.4. Правила взятия и хранения крови для исследования гликированного (гликозилированного) гемоглобина
2.4.1. Взятие крови производится утром натощак из локтевой вены, соблюдая правила асептики и антисептики.
2.4.2. Кровь собирают в специальную пробирку, содержащую ЭДТА, плавно перемешивают. Не центрифугировать!
2.4.3. Доставка в Лабораторию в день взятия крови.
2.4.4. Хранение: до 2-х недель при температуре -200С.
2.5. Правила проведения пренатального скрининга
2.5.1. Оптимальные сроки проведения исследования: I триместр – 10-13 недель беременности; II триместр – 16-18 недель беременности.
2.5.2. При направлении на исследование заполняется специальное направление, в котором необходимо указать индивидуальные данные беременной женщины: возраст (число/месяц/год), вес, результаты УЗИ (КТР, БПР, количество плодов, срок беременности по УЗИ (недели+дни); если имеются - данные о величине шейной складки - NT) с обязательным указанием даты УЗИ и ФИО врача, проводившего УЗИ; наличие дополнительных факторов риска (курение, сахарный диабет, ЭКО), этническая принадлежность.
2.5.3. Для скрининга II триместра беременности можно использовать данные УЗИ, проведенного в I триместре.
3. Правила взятия, хранения и транспортировки биоматериала
для бактериологических исследований
3.1. Взятие биоматериала производят до применения курса антибактериальной терапии или не менее, чем через неделю после ее завершения.
3.2. Для предупреждения контаминации пробы микроорганизмами из внешней среды взятый биоматериал переносят в пустой контейнер или пробирку с транспортной средой с соблюдением стандартных правил стерильности: пробка пробирки (контейнера) открывается/закрывается так, чтобы внутренняя часть пробки осталась стерильной, стерильная посуда открытой держится недолго.
3.3. Взятие биоматериала для выявления микоплазм и уреаплазм, трихомонад, гонококков, неспецифической микрофлоры , культур анаэробных бактерий производится в фирменные пробирки с угольной транспортной средой:
Упаковку открыть в указанном месте согласно схеме;
Пробирку вынуть и открыть, крышку выбросить;
Зондом взять соскоб/мазок, биоптат или обмакнуть зонд в биологическую жидкость;
Зонд с биоматериалом сразу поместить в пробирку (ручка зонда является крышкой пробирки);
Пробирку пронумеровать, номер указать в направлении.
3.4. Виды биологического материала для взятия в транспортную угольную среду: мазки/соскобы, сок предстательной железы, ликвор, синовиальная жидкость, биоптат.
3.5. Хранение биоматериала в пробирках с транспортной средой для выявления микоплазм и уреаплазм, неспецифической микрофлоры до момента транспортировки -
Доставка в Лабораторию в течение одних суток.
3.6. Хранение биоматериала в пробирках с транспортной средой для выявления трихомонад, гонококков, культур анаэробных бактерий до момента транспортировки - при комнатной температуре.
3.7. Нативный биоматериал: мокроту, сок предстательной железы, синовиальную жидкость от 1 до 10 мл для выявления неспецифической микрофлоры, микоплазм и уреаплазм собирают в пустой стерильный контейнер.
Необходимо оповестить Лабораторию накануне или в день взятия биоматериала до 11:00.
Хранение нативного биоматериала до момента транспортировки - в холодильной камере (+4ºС - +8ºС).
Доставка в Лабораторию в день взятия материала.
3.8. Мочу для исследования на степень бактериурии (утренняя средняя порция, 10-20 мл) собирают в пустой стерильный контейнер с крышкой после тщательного туалета наружных половых органов.
Необходимо оповестить Лабораторию накануне или в день взятия биоматериала до 11:00.
Хранение биоматериала до момента транспортировки - в холодильной камере (+4ºС - +8ºС).
Доставка в Лабораторию в день взятия биоматериала.
3.9. Кровь на стерильность .
Наиболее информативной является проба крови, взятая во время подъема температуры.
Кровь собирают в фирменные флаконы с двухфазной транспортной средой (флакон для взрослых, флакон для детей). Пластмассовую крышку флакона аккуратно вскрыть, появившуюся часть резиновой пробки протереть 70%-м спиртом. В стерильных условиях шприцем взять кровь из вены и ввести через резиновую пробку во флакон (4 мл - во флакон для взрослых, 2 мл - во флакон для детей).
Необходимо оповестить Лабораторию накануне или в день взятия биоматериала до 11:00.
Хранение крови до момента транспортировки - при комнатной температуре.
Доставка в Лабораторию в день взятия биоматериала.
3.10. Грудное молоко для выявления неспецифической микрофлоры берется из каждой груди в отдельный стерильный герметично закрывающийся стаканчик. Подписать стаканчики: «левая грудь», «правая грудь».
Перед сбором биоматериала грудь помыть теплой водой с мылом, вытереть чистым полотенцем, тщательно обработать соски и околососковую область ватным тампоном, смоченным 70% раствором этилового спирта, просушить стерильной салфеткой (каждая железа обрабатывается отдельным тампоном). Первые 10-15 мл сцеженного молока для анализа не используются. Вторую порцию молока из каждой груди сцедить в подписанный стаканчик в количестве ~ 10 мл.
Необходимо оповестить Лабораторию накануне или в день взятия биоматериала до 11:00.
Доставка в Лабораторию в течение 2-х часов в день взятия материала.
3.11. Кал на дисбактериоз .
Перед взятием пробы запрещается употребление алкоголя в течение 3-х суток и прием антибиотиков в течение 2-х недель. Стул необходимо получить без клизм и слабительных. Детям при запорах можно использовать для раздражающего эффекта кусочек мыла. Фекалии собирают в индивидуальное судно, отмытое от дезинфектанта. Стерильной ложкой отбирают 3-5 г средней порции кала и помещают в стерильный контейнер.
Необходимо оповестить Лабораторию накануне или в день взятия биоматериала до 11:00.
Хранение до момента транспортировки - контейнер с биоматериалом для сохранения тепла хранить обернутым в вату и бумагу.
Доставка в Лабораторию в день взятия биоматериала.
4. Правила взятия, хранения и транспортировки биоматериала
для микроскопических исследований
4.1. От каждого пациента - 2 стекла (одно стекло – запасное). На каждом стекле - 3 точки: влагалище (V ), цервикальный канал (С ), уретра (U ). Наносить мазки так, чтобы матовая поверхность была слева, сверху, и от нее – слева направо: v, c, u.
4.2. Маркировка (№) на стекле не должна растворяться в спирте (можно подписывать на матовой части стекла простым карандашом). Мазки должны быть зафиксированы посредством высушивания на воздухе (30-60 мин).
4.3. Стекла должны быть промаркированы, сложены мазками друг к другу, упакованы в индивидуальный пакет с соответствующей сопроводительной надписью (ЛПУ, Ф. И.О. пациента, № на стекле).
4.4. Пакет и заполненное направление передаются в Лабораторию.
5. Правила взятия, хранения и транспортировки биоматериала
5.1. В течение 24-х часов перед исследованием необходимо исключить спринцевание, применение интравагинальной терапии и половые контакты. Нельзя брать материал во время менструации. Наиболее информативными являются пробы, взятые на 14-20 дни после начала менструации.
5.2. Материал берется до бимануального исследования, проведения различных диагностических проб, до взятия материала на ПЦР. Взятие материала осуществляется без предварительной обработки слизистой влагалища.
5.3. Соскоб со слизистой влагалища/цервикального канала берется нейлоновой щеточкой Cervex-Brush, шпателем или другим инструментом и равномерно распределяется по стеклу, оставляя один конец стекла чистым (для маркировки). На стекло берется одна точка, дублируется еще на одно запасное стекло (всего два стекла на одну точку). Мазки должны быть зафиксированы посредством высушивания на воздухе (30-60 мин).
5.4. Стекла должны быть промаркированы (№ и Ф. И.О. пациента), сложены мазками друг к другу, упакованы в индивидуальный пакет с соответствующей сопроводительной надписью (ЛПУ, Ф. И.О. пациента, № на стекле).
5.5. Хранить высушенные мазки можно до 6 дней при комнатной температуре.
5.6. Пакет и заполненное направление (на каждую точку свое направление с указанием вида биоматериала) передаются в Лабораторию.
Не вкладывать направление в пакет со стеклами, не заворачивать стекла в направление!
Решение о необходимости исследовать ту или иную локализацию (влагалище, уретра, цервикальный канал и др.) для анализа принимает лечащий врач на основании совокупности жалоб пациентки (та) и клинической картины заболевания.Для получения объективного результата необходимо, чтобы исследуемый клинический материал содержал возможно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи и примеси крови (допустимо умеренное присутствие примесей в виде крови и слизи). Неправильное взятие биоматериала может привести к невозможности получения достоверного результата и, вследствие этого, необходимости повторного взятия биоматериала.Порядок взятия клинического материала в пробирку с транспортной средой:
1. Открыть крышку пробирки.
2. С помощью одноразового стерильного зонда получить отделяемое соответствующего
биотопа (влагалище, уретра, цервикальный канал).
3.Перенести зонд с клиническим материалом в пробирку с транспортной средой объемом 1,5 мл, когда зонд упрется в дно пробирки, дополнительным усилием согнуть тонкую часть зонда до насечки, затем отломить и оставить зонд в пробирке.При необходимости получения клинического материала из нескольких биотопов повторить процедуру, каждый раз забирая клинический материал новым зондом в новую пробирку.
3. Пробирку плотно закрыть крышкой, промаркировать.
Особенности взятия клинического материала цервикального канала:
1.Клинический материал цервикального канала получают после введения во влагалище гинекологического зеркала с помощью уретрального зонда или цервикальной цитощетки (для исследования на ВПЧ необходимо достаточное количество эпителиальных клеток!).
2.Перед взятием клинического материала необходимо тщательно обработать отверстие цервикального канала с помощью стерильного марлевого тампона и затем обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором.
3.После введения уретрального зонда в шеечный канал на 1,5 см его вращают несколько раз (2-3 полных оборота по часовой стрелке) и извлекают. При извлечении зонда необходимо полностью исключить его касание стенок влагалища.
4. Полученный клинический материал помещается в пробирку с транспортной средой (см. выше).
Особенности взятия клинического материала из влагалища:
В день обследования женщины не должны проводить туалет половых органов и спринцевание влагалища.
1. Клинический материал из влагалища получают с заднего или боковых сводов с помощью вагинального или уретрального зонда путем соскоба с поверхности эпителия.
2. Клинический материал должен быть получен ДО проведения мануального исследования.
3. Перед манипуляцией гинекологическое зеркало можно смочить теплой водой, применение антисептиков для обработки зеркала противопоказано.
4. У девочек (virgo) клинический материал получают со слизистой оболочки преддверия влагалища без использования гинекологического зеркала.
5. Полученный клинический материал помещается в пробирку с транспортной средой (см. выше).
Особенности взятия клинического материала из уретры у женщин:
1. Клинический материал из уретры получают с помощью уретрального зонда.
2.Перед взятием клинического материала пациентке рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов.
3. При наличии свободных уретральных выделений наружное отверстие уретры следует очистить с помощью ватного тампона.
4. При отсутствии свободных выделений может быть проведен легкий массаж уретры.
5. После введения инструмента в уретру на глубину 1 см необходимо продвигать его к наружному отверстию, слегка нажимая на заднюю и боковые стенки уретры (вращательные движения болезненны).
6. Полученный клинический материал помещается в пробирку с транспортной средой(см. выше).
Для исследования материала,полученного из нескольких биотопов, процедуру повторяют, каждый раз используя новый стерильный зонд и новую пробирку!!!
Недопустимо смешивать материал из цервикального канала, влагалищного содержимого и уретры в одной пробирке!
Особенности взятия клинического материала из уретры у мужчин:
1,5–2 часов. Для исключения искажений результатов определения состава микрофлоры урогенитального тракта мужчин из-за присутствия в урогенитальном тракте транзиторной микрофлоры в течение трёх дней перед взятием биоматериала рекомендуется половое воздержание или использование защищенного полового контакта.
1.Перед взятием соскоба из уретры обрабатывают головку полового члена в области наружного отверстия уретры тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором.
2.Производят массаж уретры. При наличии свободно стекающих из уретры выделений удаляют их сухим тампоном.
3.Вводят зонд в уретру на глубину 1-2 см. Несколькими вращательными движениями производят соскоб эпителиальных клеток и переносят зонд в пробирку с транспортной средой, обламывают и оставляют. Отделяемое забирают в достаточном количестве. Допустимо умеренное присутствие примесей в виде слизи, крови и гноя.
Взятия клинического материала с крайней плоти головки полового члена (ГПЧ):
Перед взятием биоматериала пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение
1,5–2 часов.
1.С помощью одноразового зонда делают соскоб эпителиальных клеток из соответствующего биотопа (крайняя плоть головки полового члена, препуциальный мешок) и переносят зонд в пробирку с транспортной средой, обламывают и оставляют.
Условия хранения и транспортировки биоматериала:
1. Пробирки с полученным клиническим материалом должны быть промаркированы.
2. В сопроводительном документе-направлении необходимо указать: ФИО, возраст пациентки (та), клинический материал, предполагаемый диагноз, показания к обследованию, дату и время взятия пробы, наименование учреждения (подразделения), направляющего клинический материал.
3. Если время транспортировки клинического материала от момента взятия до момента его доставки в лабораторию не более суток, то пробирку с клиническим материалом необходимо хранить и доставлять в лабораторию при температуре бытового холодильника (+ 4+10°С), не замораживая.
4. В случае невозможности доставки клинического образца в лабораторию в течение суток, допускается однократное замораживание и хранение образца клинического материала при температуре -20°С до одного месяца.