Reakcija inhibicije hemaglutinacije
Reakcija hemaglutinacije
Reakcija aglutinacije
Reakcija aglutinacije (RA) je sljepljivanje i taloženje mikroba ili drugih stanica pod utjecajem antitijela u prisustvu elektrolita (izotonični rastvor natrijum hlorida). Nastali talog se zove aglutinirati.
Za reakciju vam je potrebno:
1. Antitijela (aglutinini) - nalaze se u serumu pacijenta ili u imunološkom serumu.
2. Antigen - suspenzija živih ili ubijenih mikroorganizama, crvenih krvnih zrnaca ili drugih ćelija.
3. Izotonični rastvor.
Reakcija aglutinacije za serodijagnostiku se široko koristi za trbušni tifus, paratifus (Vidalova reakcija), brucelozu (Wrightova reakcija) itd. pacijentov serum, a antigen je poznati mikrob.
Prilikom identifikacije mikroba ili drugih ćelija, njihova suspenzija se koristi kao antigen, a poznati imunološki serum se koristi kao antitijelo. Ova reakcija se široko koristi u dijagnostici crijevne infekcije, veliki kašalj itd.
U laboratorijskoj praksi koriste se dvije reakcije hemaglutinacije (HRA) koje se razlikuju po mehanizmu djelovanja.
Prvi RGA odnosi se na serološke. U ovoj reakciji, crvena krvna zrnca se aglutiniraju u interakciji s odgovarajućim antitijelima (hemaglutinini). Reakcija se široko koristi za određivanje krvnih grupa.
Drugi RGA nije serološki. U njemu, lijepljenje crvenih krvnih stanica nije uzrokovano antitijelima, već posebnim tvarima koje stvaraju virusi. Na primjer, virus gripe aglutinira pileća crvena krvna zrnca i zamorci, virus poliomijelitisa - crvena krvna zrnca ovaca. Ova reakcija omogućava procjenu prisutnosti određenog virusa u materijalu koji se proučava.
Ovo je serološka reakcija u kojoj specifična antivirusna antitijela, u interakciji s virusom (antigenom), neutraliziraju ga i lišavaju mu sposobnost aglutinacije crvenih krvnih stanica, odnosno inhibiraju reakciju hemaglutinacije. Visoka specifičnost reakcije inhibicije hemaglutinacije (HAI) omogućava joj da se koristi za određivanje tipa, pa čak i vrste virusa otkrivenih tokom HRA testa.
Indirektna (pasivna) reakcija hemaglutinacije (IRHA) temelji se na činjenici da crvena krvna zrnca, ako se na njihovoj površini adsorbira rastvorljivi antigen, stiču sposobnost aglutinacije u interakciji s antitijelima na adsorbirani antigen. RNGA dijagram je prikazan na sl. RNGA se široko koristi u dijagnostici brojnih infekcija.
Rice. Shema reakcije pasivne hemaglutinacije (RPHA). A - dobijanje eritrocitnog dijagnostikuma; B - RNGA: 1-eritrocit: 2 - antigen koji se proučava; 3 - dijagnostikum eritrocita; 4 - antitelo na antigen koji se proučava: 5 - aglutinirati.
Koristeći RNGA, možete odrediti nepoznati antigen ako su poznata antitijela adsorbirana na eritrocite.
Zasniva se na činjenici da crvena krvna zrnca, na kojima se prethodno adsorbiraju antigeni, stiču sposobnost aglutinacije u prisustvu homolognih seruma (antitijela).
U ovom slučaju crvena krvna zrnca djeluju kao nosioci specifičnih determinanti, čija aglutinacija nastaje kao rezultat reakcije antigen + antitijelo.
Crvena krvna zrnca za čiju su površinu antigeni čvrsto vezani nazivaju se eritrocitni antigen diagnosticum, ili eritrociti senzibilizirani antigenom.
Druga vrsta RNGA - antitijela se adsorbiraju na površini eritrocita i njihova naknadna aglutinacija se događa u prisustvu homolognog antigena. U ovom slučaju, takvi eritrociti se nazivaju dijagnostikom eritrocitnih antitijela, ili eritrociti senzibilizirani antitijelima.
Na osnovu ova dva temeljna metodološka pristupa razvijene su i korištene mnoge modifikacije RNGA. Stoga se male standardne čestice lateksa koriste kao nosači. U ovom slučaju, reakcija se naziva reakcija lateks aglutinacije (RLA) ili se koristi Staphylococcus aureus- reakcija koaglutinacije itd. Obično se dijagnostikumi eritrocita pripremaju u preduzećima biološke industrije, a glavno iskustvo RNGA provodi se u dijagnostičkim laboratorijama.
Priprema dijagnostikuma eritrocita uključuje sljedeće korake:
- fiksacija crvenih krvnih zrnaca s formaldehidom ili glutarnim ili akrilnim aldehidima. Ovako tretirana crvena krvna zrnca se čuvaju dugo vremena. Češće se u tu svrhu koriste eritrociti ovaca, ljudi, pilića itd.;
- tretman fiksiranih eritrocita otopinom tanina. Kao rezultat, crvena krvna zrnca stječu sposobnost da nepovratno adsorbiraju proteine (viruse i antitijela) na svojoj površini;
- senzibilizacija taniziranih eritrocita virusima ili antitijelima.
Treba napomenuti da su metode za pripremu eritrocitnih dijagnostikuma za virusne infekcije drugačije.
Procedura za izvođenje RNGA za otkrivanje i određivanje titra antitijela je sljedeća:
- jednake doze eritrocita senzibiliziranih antigenom dodaju se uzastopnim 2-strukim razrjeđenjima seruma;
- smjesa se ostavi 2-3 sata na sobnoj temperaturi ili 16-18 sati na 4 °C;
- uzeti u obzir rezultate. Ako serum sadrži antitijela na virus kojim su crvena krvna zrnca senzibilizirana, uočava se hemaglutinacija, koja se procjenjuje u križanju.
Smatra se da je titar antitijela u serumu najveće razrjeđenje seruma koje još uvijek osigurava hemaglutinaciju pomoću najmanje dva ukrštanja.
RNGA je praćen svim relevantnim kontrolama. Obično se reakcija izvodi mikrometodom.
RNGA vam omogućava da riješite sljedeće dijagnostičke probleme:
- detektovati antitijela i odrediti njihov titar u krvnom serumu pomoću poznatog dijagnostikuma antigena eritrocita;
- otkriti i identificirati nepoznati virus pomoću poznate dijagnostike eritrocitnih antitijela.
Prednosti RNGA: visoka osjetljivost, jednostavnost tehnike postavljanja i brzina odgovora. Međutim, važno je napomenuti da se javljaju velike poteškoće u pripremi stabilne dijagnostike eritrocita (velika ovisnost o čistoći korištenih komponenti, potreba za odabirom načina fiksacije, tanizacije i senzibilizacije eritrocita za svaku vrstu virusa).
Sadržaj teme "Imunomodulatori. Imunodijagnostika zaraznih bolesti.":Detaljna reakcija aglutinacije (RA). Za određivanje AT u pacijentovom krvnom serumu, a ekstenzivna reakcija aglutinacije (RA). Da bi se to postiglo, nizu razrjeđenja krvnog seruma dodaje se dijagnostikum - suspenzija ubijenih mikroorganizama ili čestica sa sorbiranim Ag. Maksimalno davanje razblaženja aglutinacija Ag se naziva serumski titar.
Vrste reakcija aglutinacije (RA) za identifikaciju AT - test kapi krvi na tularemiju (sa dijagnostikom primijenjenom na kap krvi i pojavom vidljivih bjelkastih aglutinata) i Huddlesonov test za brucelozu (sa dijagnostikumom obojenim gencijan ljubičastom nanesenom na kap krvi serum).
Približna reakcija aglutinacije (RA)
Za identifikaciju izolovanih mikroorganizama, približni RA se stavlja na staklena stakalca. Da bi se to postiglo, kultura patogena se dodaje kapi standardnog dijagnostičkog antiseruma (razrijeđenog 1:10, 1:20). At pozitivan rezultat izvršiti detaljnu reakciju sa povećanjem razrjeđenja antiseruma.
Reakcija smatra se pozitivnim ako se primijeti aglutinacija u razrjeđenjima koja su blizu titra dijagnostičkog seruma.
OAS. Somatski O-Ags su toplotno stabilni i mogu izdržati ključanje 2 sata.
N-Ag. N-Ag (flagelati) termolabilni su i brzo se razgrađuju na 100 °C, kao i pod uticajem etanola. U reakcijama s H-antiserumom, nakon 2 sata inkubacije, formiraju se labave velike pahuljice (nastale od bakterija koje se lijepe sa flagelama).
Vi-Ar tifusna bakterija je relativno toplotno stabilna (podnosi temperature od 60-62 °C 2 sata); Kada se inkubira sa Vi antiserumom, formira se sitnozrnasti aglutinat.
Direktne reakcije hemaglutinacije
Najjednostavniji od ovih reakcije - aglutinacija crvena krvna zrnca ili hemaglutinacija, koja se koristi za određivanje krvnih grupa u ABO sistemu. Za utvrđivanje aglutinacija(ili nedostatak istih) koristite standardne antiserume sa anti-A i anti-B aglutininima. Reakcija se naziva direktna, jer su Ags koji se proučavaju prirodne komponente crvenih krvnih zrnaca.
Zajedničko sa direktna hemaglutinacija virusna hemaglutinacija ima mehanizme. Mnogi virusi su sposobni spontano aglutinirati eritrocite ptica i sisara, njihovo dodavanje u suspenziju eritrocita uzrokuje stvaranje agregata iz njih.
Vidal reakcija. Od druge sedmice bolesti u krvi pacijenata se nakupljaju antitijela protiv infektivnog agensa. Da bi se oni identificirali, pacijentov krvni serum se ispituje u reakciji aglutinacije. Ubijene kulture salmonele - dijagnostikumi - koriste se kao antigeni.
Za izvođenje Widal reakcije koristi se pacijentov serum, set dijagnostičkih kompleta i izotonična otopina natrijevog klorida.
Krv (2-3 ml) iz pulpe prsta ili kubitalne vene sakuplja se u sterilnu epruvetu i dostavlja u laboratoriju. U laboratoriji se epruveta stavlja u termostat na 20-30 minuta da se formira ugrušak, zatim se Pasterovom pipetom kruži ugrušak da se odvoji od zida epruvete i stavlja na hladno. 30-40 minuta. Izdvojeni serum se odsisava i koristi za obavljanje reakcije aglutinacije uz dijagnostiku Salmonella tifusa i paratifusne groznice. Krv se može centrifugirati da se dobije serum.
Kad god infektivnog procesa - tifusna groznica ili paratifus - tijelo proizvodi O- i H-antitijela na iste antigene patogena.
O-antitijela se pojavljuju prva i vrlo brzo nestaju. H-antitijela traju dugo. Ista stvar se dešava i sa vakcinacijom, dakle pozitivna reakcija Vidal sa O- i H-antigenima ukazuje na prisustvo bolesti, a reakcija samo sa H-antigenima može se javiti i kod onih koji su se oporavili od bolesti (anamnestička reakcija) i kod onih koji su vakcinisani (reakcija vakcine). Na osnovu toga, Widal reakcija se izvodi odvojeno sa O- i H-antigenima (dijagnostikumi).
Budući da su trbušni tifus i paratifus A i B klinički slični, da bi se utvrdila priroda bolesti, pacijentov serum se testira istovremeno s dijagnostikom Salmonella tifusa i paratifusa A i B.
Widalova reakcija se široko koristi jer je jednostavna i ne zahtijeva posebne uvjete.
Reakcija se može izvesti na dva načina: kap po kap i volumetrijski (vidi Poglavlje 12). U praksi se češće koristi volumetrijska metoda. Prilikom izvođenja reakcije linearne aglutinacije, broj redova mora odgovarati broju antigena (dijagnostikuma). Uzročnikom bolesti smatra se mikroorganizam od kojeg je serumom bolesnika aglutinirao dijagnostikum. Ponekad se primjećuje grupna aglutinacija, jer uzročnici tifusa i paratifusa imaju zajedničke grupne antigene. U ovom slučaju pozitivnim se smatra rezultat reakcije u seriji u kojoj se aglutinacija bilježi u većem razrjeđenju seruma (tabela 36).
Tabela 36. Mogući rezultat reakcije aglutinacije
Bilješka. U praksi se Widalova reakcija izvodi sa četiri dijagnostikuma: trbušni tifus “O” i “H” i paratifus A i B sa dijagnostikumima “ON”.
Ako se aglutinacija javlja samo u malim razrjeđenjima seruma - 1:100, 1:200, tada se radi razlikovanja reakcije tokom bolesti od reakcije vakcinacije ili anamnestičke reakcije pribjegavaju ponavljanju reakcije aglutinacije nakon 5-7 dana. Kod pacijenta se titar antitijela povećava, ali se kod vakcinisane ili oporavljene osobe ne mijenja. Dakle, povećanje titra antitijela u krvnom serumu služi kao indikator bolesti.
Kao odgovor na unošenje patogena tifusa koji posjeduju antigen Vi u tijelo, Vi aglutinini se pojavljuju u krvi pacijenta. Otkrivaju se od 2. sedmice bolesti, ali njihov titar obično ne prelazi 1:10. Detekcija Vi-antitijela je povezana sa prisustvom patogena tifusa u organizmu, stoga je određivanje ovih antitijela od velikog epidemiološkog značaja, jer omogućava identifikaciju nosilaca bakterija.
Reakcija Vi-hemaglutinacije. Ovo je najosjetljivija reakcija za otkrivanje antitijela.
Princip reakcije je da ljudski (grupa I) ili ovčiji eritrociti nakon posebnog tretmana mogu adsorbirati Vi-antigen na svojoj površini i time steći sposobnost aglutinacije sa odgovarajućim Vi-antitijelima.
Crvena krvna zrnca s antigenima adsorbiranim na površini nazivaju se eritrocitni dijagnostici.
Za izvođenje Vi-hemaglutinacijske reakcije uzmite:
1) pacijentov krvni serum (1-2 ml); 2) eritrocitna Salmonella Vi-diagnosticum; H) Vi-serum; 4) O-serum; 5) izotonični rastvor natrijum hlorida.
Reakcija se izvodi u epruvetama za aglutinaciju ili u plastičnim pločama s jažicama.
Krv se uzima od pacijenta na isti način kao i za Vidalovu reakciju. Dobija se serum. Dvostruka serijska razrjeđenja se pripremaju iz seruma, počevši od 1:10 do 1:160.
Po 0,5 ml svakog razblaženja se dodaje u jažicu i dodaje se 0,25 ml dijagnostikuma eritrocita. Reakcija se izvodi u zapremini od 0,75 ml.
Kontrole su: 1) standardni aglutinirajući monoreceptorski serum + dijagnostikum - reakcija mora biti pozitivna do titra seruma; 2) dijagnostikum u izotonični rastvor natrijum hlorid (kontrola) - reakcija bi trebala biti negativna.
Sadržaj jažica se dobro promeša, stavi u termostat na 2 sata i ostavi na sobnoj temperaturi do sledećeg dana (18-24 sata).
Računovodstvo počinje kontrolom. Reakcija se procjenjuje u zavisnosti od stepena aglutinacije dijagnostikuma.
Rezultati se uzimaju u obzir po sistemu četiri križa:
Crvena krvna zrnca su potpuno aglutinirana - sediment na dnu bunara u obliku "kišobrana";
+++ “kišobran” je manji, nisu sva crvena krvna zrnca aglutinirana;
++ „kišobran“ je mali, na dnu rupe nalazi se sediment neaglutiniranih eritrocita;
Reakcija je negativna; crvena krvna zrnca se nisu aglutinirala i taložila su se na dno bunara u obliku dugmeta.
1. U kom periodu bolesti se izvodi Vidalova reakcija?
2. Koji sastojci su potrebni za izvođenje Widal reakcije?
3. Koja se dijagnostika koristi za izvođenje Vidalove reakcije?
4. Koja je serološka reakcija najosjetljivija u dijagnostici tifusnih paratifusnih infekcija?
5. Koji dijagnostikum se koristi pri izvođenju Vi-hemaglutinacijske reakcije?
6. Koji serum se koristi za određivanje prisustva Vi-antigena u proučavanoj kulturi?
7. Kakav je značaj određivanja Vi-fagotipa?
Uzmite O- i H-dijagnostiku za Salmonella tifus, paratifus A i paratifus B i pacijentov serum od učitelja. Dajte Vidalovu reakciju.
Kulturni mediji
EMS, Ploskireva i bizmut-sulfit agar podloge proizvodi se u medicinskoj industriji u obliku suhog praha. Pripremaju se prema uputstvu na etiketi: odvažite određenu količinu praha, ulijte odgovarajuću količinu vode, prokuvajte i sipajte u sterilne Petrijeve posude.
Russell Wednesday. Dodati 40 g suhe hranjive podloge u 950 ml destilovane vode i dodati 5 g hranljivog agara. Zagrijte dok prašci ne proključaju i rastvore se. 1 g x rastvori se u 50 ml destilovane vode. sata glukoze i dodajte u pripremljenu smjesu. Medij se sipa u sterilne epruvete od 5-7 ml, steriliše tekućom parom (2 dana po 2 minuta) i kosi tako da ostane kolona. Na isti način se priprema i Russellova podloga sa manitolom i saharozom.
Podloga Olkenitskog iz suvog agara. 2,5 g suvog hranljivog agara rastopi se u 100 ml destilovane vode. U agar ohlađen na 50°C dodaju se svi sastojci navedeni u receptu (oznaka). Medij koji se sipa u epruvete steriliše se tekućom parom (3 dana po 20 minuta) i zatim se kosi. Pripremljeni medij treba da bude blijedo ružičaste boje.
reakcija pasivne hemaglutinacije) metoda za detekciju i identifikaciju antigena ili antitela, zasnovana na fenomenu aglutinacije crvenih krvnih zrnaca koji se javlja u njihovom prisustvu, na čijoj površini su prethodno adsorbovani odgovarajući specifični ili antigeni.
1. Mala medicinska enciklopedija. - M.: Medicinska enciklopedija. 1991-96 2. Prvo zdravstvenu zaštitu. - M.: Velika ruska enciklopedija. 1994 3. Enciklopedijski rječnik medicinski termini. - M.: Sovjetska enciklopedija. - 1982-1984.
Pogledajte šta je "indirektna reakcija hemaglutinacije" u drugim rječnicima:
reakcija indirektne hemaglutinacije- RNGA Laboratorijski test pomoću dijagnostike eritrocita. [Englesko-ruski pojmovnik osnovnih pojmova u vakcinologiji i imunizaciji. Svjetska zdravstvena organizacija, 2009] Teme vakcinologija, imunizacija Sinonimi RNGA EN...... Vodič za tehnički prevodilac
- (RNHA; sinonim za reakciju pasivne hemaglutinacije) metoda za detekciju i identifikaciju antigena ili antitela, zasnovana na fenomenu aglutinacije eritrocita koja se javlja u njihovom prisustvu, na čijoj površini su prethodno bili adsorbovani... .. . Veliki medicinski rječnik
- (RPHA) vidi Indirektna reakcija hemaglutinacije... Veliki medicinski rječnik
Ova stranica je pojmovnik. # A... Wikipedia
Osnovne skraćenice usvojene u Veterinarskom enciklopedijskom rječniku- a., aa, artena, arteriae aa ana (jednako) Akademija medicinskih nauka SSSR Akademija medicinskih nauka SSSR Akademija nauka SSSR Akademija nauka SSSR Bac. Bacillus Bact. Bakterija BSSR Bjeloruska SSR c., vek. vek, vekovi v., v. vena, venae VASKHNIL Svesavezni orden Lenjina i ... ...
Ovaj izraz ima druga značenja, vidi Kuga. Čuma mesojeda (Kareova bolest) akutna ili subakutna zarazna virusna bolest, manifestuje se groznicom, kataralnim upalom sluzokože, lezijama kože, centralnim ... ... Wikipedia
- (renes) upareni ekskretorni i endokrini organ koji reguliše hemijsku homeostazu organizma kroz funkciju stvaranja urina. ANATOMSKO FIZIOLOŠKA SKICA Bubrezi se nalaze u retroperitonealnom prostoru (Retroperitonealni prostor) na... ... Medicinska enciklopedija
I (trihineloza; sinonim: trihineloza, “puffy”) helmintoza iz grupe nematoda, koju karakteriše groznica, mijalgija, oticanje lica, kožni osip, eozinofilija u krvi i sa težak tok poraz unutrašnje organe i centralno..... Medicinska enciklopedija
- (nematodoze) helmintiaze uzrokovane nematodama okrugli crvi klasa Nematoda. Od ostalih helmintioza, N. imaju najveća vrijednost u ljudskoj patologiji, većina njih su geohelmintijaze (vidi Helmintijaze); razvoj njihovih jaja ili larvi...... Medicinska enciklopedija
infektivni epididimitis- Pirinač. 1. Povećanje lijevog testisa kod ovce sa infektivnim epididimitisom. Rice. 1. Povećanje lijevog testisa kod ovce sa infektivnim epididimitisom. infektivni epididimitis ovaca (Epididymitis infectiosa arietum), kronični infektivni ... ... Veterinarski enciklopedijski rječnik
Pogledajte Indirektna reakcija hemaglutinacije... Veliki medicinski rječnik