Метод толстого мазка под целлофаном. Методы диагностики гельминтозов

Испражнения исследуются двумя методами:

1. Макроскопический – обнаруживают гельминтов, их головки, членики, обрывки стробилы. Небольшие порции кала, перемешивают с водой в плоской ванночке или чашке Петри и просматривают при хорошем освещении на темном фоне, при необходимости пользуясь лупой. Все подозрительные образования пинцетом переносят в другую чашку с водой или на предметное стекло в каплю разведенного глицерина.

При методе отстаивания исследуемую порцию фекалий размешивают с водой в стеклянном цилиндре, после отстаивания сливают верхний слой воды. Так повторяют несколько раз. Когда жидкость станет прозрачной ее сливают, а осадок просматривают в чашке Петри.

2. Микроскопический – для обнаружения яиц и личинок гельминтов. Существует много методов исследования.

1). Нативный мазок – наиболее распространенный и технически доступный метод исследования. Можно обнаружить яйца и личинки всех гельминтов. Однако, при небольшом количестве яиц их не всегда удается найти. Поэтому используется метод обогащения.

1). Метод Фюллеборга – это метод обогащения, основан на всплытии яиц гельминтозов в насыщенном растворе NaCl (1,2 – плотность; 400 г NaCl на 1 литр воды; 40% раствор NaCl). Метод более эффективен, чем нативный мазок. В стеклянные банки помещают 2-5 г фекалий и заливают раствором NaCl, размешивают и через 45 минут снимают образовавшуюся пленку металлической петлей, помещают каплю глицерина на предметное стекло. Исследуют под микроскопом. Недостаток метода – замедленное высплывание яиц различных гельминтов, карликовый цепень – через15-20 минут, аскарид – 1,5 часа, власоглав – 2-3 часа.

2) Метод Калантарян – также метод обогащения, но применяется насыщенный раствор NaNO 3 (1,38 плотность). Большинство яиц всплывает, не требуется исследования осадка. Недостаток – длительное выдерживание яиц в растворе, приводит к тому, что некоторые яйца начинают набухать и оседать на дно, исчезая с поверхностной пленки.

3. Метод Горячева – основан на принципе осаждения яиц, обнаружения мелких яиц трематод. В качестве раствора используют насыщенный раствор NaCl и сверху осторожно наслаивают 3-4 мл раствора фекалий. Через 15-20 часов яйца трематод оседают на дно. Жидкость сливают, осадок на предметное стекло и под микроскоп.

4. Метод закручивания по Шульману – для обнаружения в кале личинок гельминтов. Исследуют только свежевыделенные фекалии. 2-3 г помещают в стеклянную банку и приливают 5-кратное количество воды, быстро размешивают палочкой, не касаясь стенок банки – 20-30 минут, затем палочку быстро вынимают, и каплю жидкости на конце переносят на предметное стекло и микроскопируют.

5. Метод Бермана – основан на способности, личинок гельминтов мигрировать, по направлению к теплу, и служит для выявления их в фекалиях.

6. Метод Харада и Мори (метод выращивания личинок) и рекомендуется для исследования на анкилостомитозы. Метод основан на том, что в тепле и на влажной фильтрованной бумаге из яиц анкилостомид развиваются филяриевидные личинки, которые легко можно обнаружить. На середину полоски фильтрованной бумаги наносят 15 г кала, бумагу с фекалиями помещают в банку, так, чтобы нижний конец был погружен в воду, а верхний закреплен пробкой. Банку выдерживают в термостате 28 0 С в течение 5-6 дней. Филяриевидные личинки развиваются за это время и спускаются в воду. Жидкость исследуют под лупой. Если трудно обнаружить, жидкость центрифугируют, убив предварительно личинок нагреванием до 60 0 . Лаборант должен работать в перчатках.

7. Методы на энтеробиоз – выявление яиц острицы и бычьего цепня.

а) соскоб с перианальных складок – ватным тампоном, туго намотанным на деревянную палочку и смоченную 50% раствором глицерина. В лаборатории тампон смывают 1-2 каплями 50% водным раствором глицерина.

б) метод липкой лепты (метод Грэхэма)

Липкую ленту прикладывают к перианальным складкам, затем липким слоем к предметному стеклу и микроскопируют.

В) соскоб с помощью глазных палочек (метод Рабиновича). Для перианального соскоба используют стеклянные глазные палочки, широкая часть которых покрывается специальным клеем, что позволяет удерживать яйца остриц.

Исследование крови, желчи, мокроты и мышц

Микроскопия крови – обнаруживают личинки филярий.

Исследование мокроты – яйца параганима, личинки аскариды, некатора, стронгилоида, элементы эхинококкового пузыря.

Исследование мышц – при подозрении на трихинеллез исследуют мышцы больного или трупа, а также мясо, предположительно послужившего причиной заражения человека. С целью трихинеллоскопии мышцу разрезают на мелкие кусочки и помещают в компрессорий, это два широких, толстых стекла, которые раздавливают мышцы и личинки трихинеллы обнаруживаются в виде капсул – метод компрессии.

Метод переваривания – мышцы заливают искусственным желудочным соком (раствор соляной кислоты и пепсин). Мышцы перевариваются, а личинки легко выявляются. Определение интенсивности инвазии: количество личинок до 200 на 1 г мышечной ткани – умеренная интенсивность инвазии; до 500 – интенсивная; свыше 500 – сверхинтенсивная инвазия.

Серологические методы

Отбор проб и их консервирование

Для исследования берут фекалии из разных мест порциями в количестве 50 г и в чистой стеклянной или пластмассовой посуде с плотной крышкой направляют в лабораторию. Исследованию подвергаются свежие фекалии (не более суточной давности), а в некоторых случаях (при исследовании на стронгилоидоз) сразу после дефекации. Предложен ряд консервантов фекалий, содержащих яйца гельминтов: 4-10% раствор формалина, который для предупреждения развития яиц анкилостомид необходимо подогреть до t° 50-60°; смесь 0,2% водного раствора азотнокислого натрия (1900 мл), раствора Люголя (5 г йода, 10 г йодистого калия, 250 мл воды), формалина (300 мл) и глицерина (25 мл), в к-рой яйца гельминтов сохраняются 6-8 мес.; смесь глицерина (5 мл), формалина (5 мл) и воды (100 мл); растворы 1-1,5% детергентов «Лотос», «Экстра», «Барф», «Тайд» и т. д. (в весовом соотношении фекалий и раствора детергента 1: 5); смесь мертиолата 1: 1000 (200 мл), формалина (25 мл), глицерина (5 мл), дистиллированной воды (250 мл) с добавлением 0,6 мл раствора Люголя (из расчета 1 г фекалий на 10 мл смеси).

Для диагностики гельминтозов применяются макро- и микрогельминтоскопические методы исследования фекалий.

Макрогельминтоскопические исследования

Метод отстаивания

Суточную порцию фекалий тщательно перемешивают с 5-10-кратным количеством воды, сливают в высокие стеклянные цилиндры (банки, ведра) и оставляют до полного осаждения взвешенных частиц. Верхний мутный слой осторожно сливают и доливают чистую воду доверху (повторяют несколько раз, пока вода над осадком не станет прозрачной). Слив верхний слой, переносят осадок в кювету или чашку Петри и просматривают его (на темном фоне) под лупой или невооруженным глазом.

Метод отсеивания

Перемешанные с водой фекалии помещают на верхнее сито прибора, состоящего из системы сит с отверстиями убывающего диаметра, прибор соединяют с водопроводной сетью и, открыв водопроводный кран, промывают, а вытекающую жидкость отводят в канализацию. Крупные гельминты остаются на верхнем сите, а более мелкие задерживаются на нижних. Сита переворачивают и, смыв содержимое в темные кюветы, просматривают невооруженным глазом или под лупой.

Микрогельминтоскопические исследования

Проводят с целью обнаружения яиц (гельминтоовоскопические методы - цветн. рис. 1) или личинок гельминтов (гельминтоларвоскопические методы).

Гельминтоовоскопические методы

Качественные методы без обогащения

Нативный мазок . Небольшое количество фекалий растирают на предметном стекле в капле 50% раствора глицерина или кипяченой воды. Крупные частицы осторожно удаляют, смесь покрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом (просматривают два мазка). Удобнее и проще готовить длинные мазки между двумя предметными стеклами. Нативный мазок применяют только в дополнение к методам обогащения, т. к. он недостаточно эффективен, особенно при слабых инвазиях.

Толстый мазок с целлофаном по Като (К. Kato, 1954) является весьма эффективным методом исследования. Кусочки гидрофильного целлофана (размером 4x2 см) замачивают на 24 часа в смеси глицерина (50 мл), 6% раствора фенола (500 мл) и 3% водного раствора (6 мл) зеленой малахитовой (последняя не обязательна). Ок. 100 мг фекалий размазывают на предметном стекле и, покрыв кусочком влажного целлофана, придавливают резиновой пробкой № 5. Препарат исследуют через 30-60 мин., когда он слегка подсохнет и просветлится, вследствие чего яйца гельминтов легко обнаружить под малым увеличением микроскопа.

Качественные методы с обогащением (методы всплывания и осаждения)

Первые основаны на применении насыщенных растворов различных хим. веществ, в которых яйца всплывают благодаря разнице удельного веса.

Метод Кофоида-Барбера (Ch.А. Kofoid, М. A. Barber) в модификации Фюллеборна (F. Fulleborn, 1920). Ок. 5 г фекалий в высокой и узкой баночке (объемом 100 мл) размешивают деревянной палочкой в 100 мл насыщенного раствора поваренной соли, уд. вес к-рого 1,18 (400 г соли растворяют при кипячении в 1 л воды). Всплывшие на поверхность крупные частицы быстро удаляют палочкой или кусочком бумаги. После отстаивания смеси в течение 45-90 мин. проволочной петлей (диам. 0,8-1 см) снимают всю поверхностную пленку, переносят ее на предметное стекло. При исследовании на яйца анкилостомид смесь отстаивают 10-15 мин. Можно снимать пленку непосредственно предметным стеклом, к-рым покрывают баночку так, чтобы оно соприкасалось с жидкостью (насыщенный раствор соли доливают до краев баночки). После отстаивания предметное стекло снимают, быстро переворачивают и исследуют под микроскопом (без покровного стекла) приставшую к нему пленку с яйцами гельминтов. Этот метод хорошо выявляет яйца всех нематод и карликового цепня. Тяжелые яйца трематод; большинства цестод и неоплодотворенных аскарид всплывают плохо, поэтому исследуют и осадок. Для этого после снятия пленки жидкость из баночки быстро сливают и из осадка петлей или пипеткой берут несколько капель, переносят их на предметное стекло, добавляют каплю глицерина для просветления и исследуют под микроскопом.

Метод Е. В. Калантарян (1938) Является более эффективной модификацией метода Фюллеборна. В нем раствор поваренной соли заменен насыщенным раствором азотнокислого натрия, уд. вес к-рого 1,39 (один объем азотнокислого натрия растворяют в равном объеме воды при кипячении), пленку снимают через 20-30 мин.

Применяются также методы Фауста (Е. С. Faust, 1939), Брудастова с соавт. (1970) и др.

Для осаждения яиц гельминтов используют хим. вещества, растворяющие жиры и белки фекалий.

Метод Телеманна (W. Telemann, 1908) в модификации Миягавы (Y. Miyagawa, 1913) . Ок. 5 г фекалий растирают в ступке или баночке, добавив по 5 мл этилового эфира и 50% раствора соляной к-ты; смесь процеживают через проволочное или волосяное сито в пробирку и центрифугируют. В пробирке образуется 3 слоя: вверху - эфир с растворенным жиром, ниже - соляная к-та с растворенными белковыми веществами, в осадке - нерастворимые части фекалий и яйца гельминтов. Верхние слои сливают, а к осадку добавляют воду и центрифугируют. Несколько капель осадка переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом. Этим методом можно обнаружить яйца всех видов гельминтов, но они иногда деформируются.

Метод Ритчи (L. S. Kitchie, 1948). Для растворения жиров и белков используют формалин и эфир.

Для осаждения яиц гельминтов можно применять различные детергенты. За рубежом получил распространение метод фильтрации в специальных аппаратах Белла, который применяется для исследований не только фекалий, но и мочи, крови и т. д.

Существует ряд методов, сочетающих принципы флотации и осаждения яиц. К их числу относятся методы Лейна (С. A. Lane), Риваса (D. Rivas), Горкиной, Дарлинга (S. Т. Darling). Один из таких флотационно-седиментационных методов, а также метод последовательных сливов предложены Н. В. Демидовым (1963, 1965) для исследования на фасциолез и дикроцелиоз.

Количественные методы

Метод Столла (N. R. Stoll, 1926). В градуированную широкую пробирку или колбочку (с двумя метками: 56 и 60 мл) наливают до первой метки децинормальный раствор едкого натра, добавляют фекалии до тех пор, пока уровень жидкости не достигнет второй метки, тщательно перемешивают стеклянной палочкой и, поместив 10 стеклянных бусинок или мелких камешков, закрывают пробкой и встряхивают в течение 1 мин. Быстро, чтобы взвесь не отстоялась, набирают градуированной пипеткой 0,075 мл смеси (0,005 г фекалий), переносят на предметное стекло с нанесенной на нем сеткой, покрывают покровным стеклом и подсчитывают под микроскопом яйца гельминтов в препарате; умножив полученное число на 200, получают количество яиц в 1 г фекалий. Для более точного результата подсчитывают яйца в двух или более препаратах и берут средний показатель. Метод Столла нечувствителен при слабых инвазиях. Поэтому рекомендуют подсчитывать число яиц в препаратах, приготовленных различными методами флотации или осаждения, при условии постоянного использования равной навески фекалий и посуды одного объема. Используют также толстый мазок по Като.

Метод Бивера (Р. С. Beaver, 1950). Готовят стандартный мазок, густоту к-рого определяют при помощи электрофотометра, а затем подсчитывают в нем все яйца гельминтов.

Гельминтоларвоскопические методы

Метод Берманна (G. Baermann, 1917). 5-10 г свежевыделенных фекалий помещают на металлической сетке в стеклянную воронку, на узком конце к-рой надета резиновая трубка с зажимом. Во избежание загрязнения осадка частицами кала рекомендуется подкладывать (на сетку) бумагу или добавлять в фекалии животный уголь или кукурузную муку. Воронку наполняют теплой водой (t° 45-50°) до соприкосновения с фекалиями. В силу термотропности личинки активно перемещаются в теплую воду и постепенно скапливаются в нижней части воронки, над зажимом. Через 3-4 часа зажим открывают, жидкость спускают в 1-2 пробирки, центрифугируют в течение 2-3 мин., верхний слой сливают, а осадок исследуют на предметном стекле под микроскопом.

Метод выявления мирацидиев шистосом. Фекалии промывают в темноте при t° 8-10°, осадок выдерживают 45 мин. на ярком свете при t° 28°, затем переливают в темную колбу с трубочкой сбоку. Мирацидии концентрируются в прозрачной боковой трубке, откуда их можно выбрать.

Для выявления личинок анкилостом применяют также методы Фюллеборна и др.

Методы исследования других выделений, а также тканей и органов

Ок. 100 мл исследуемой мочи отстаивают 30 мин. в цилиндре и, удалив верхний слой, сливают 10- 15 мл осадка в пробирку, центрифугируют при 1500 об I мин в течение 1-2 мин.; осадок исследуют. Желательно собирать всю суточную порцию мочи.

Моче-половой шистосоматоз диагностируют путем выявления мирацидиев. Порцию свежей мочи центрифугируют в течение 5 мин., осадок переливают в окрашенную в черный цвет колбу, к верхней части к-рой припаяна прозрачная стеклянная трубочка. Добавляют воду в соотношении 1:5, 1: 10 и ставят на 2 часа в термостат при t° 25-30°. Вышедшие из яиц мирацидии видны через прозрачную трубочку невооруженным глазом в виде быстро движущихся точек. При хрон, форме шистосоматоза у больных к концу мочеиспускания выделяется кровь, но яйца в моче находят редко, поэтому рекомендуется прибегать к биопсии мочевого пузыря.

Исследование мокроты. В мокроте могут находиться яйца парагонимусов, шистосом, томинксов, личинки мигрирующих нематод, фрагменты эхинококкового пузыря. Всю доставленную порцию мокроты тщательно просматривают невооруженным глазом или под лупой, выбирают и исследуют все видимые обрывки тканей, скопления ржавого цвета и пр.; затем просматривают всю порцию мазками. Гнойную мокроту заливают равным количеством 0,5% раствора едкой щелочи, центрифугируют и исследуют осадок.

При некоторых гельминтозах в мокроте наблюдаются характерные изменения. При парагонимозе, напр., в мокроте можно обнаружить скопления яиц в виде желтоватых комочков, а также большое количество слизи, лейкоциты, эритроциты, альвеолярные клетки, спирали Куршманна, эластические волокна, кристаллы Шарко-Лейдена. Выявлены также характерные ромбовидные кристаллы с заостренными концами. Наличие большого числа эозинофилов позволяет дифференцировать парагонимоз от туберкулеза.

Исследование содержимого абсцессов и пунктатов . В гнойных выделениях абсцессов, а также в опухолях и кистах, удаленных при оперативном вмешательстве, можно обнаружить гельминтов, их фрагменты, личинки и яйца (эхинококк, альвеококк, спарганум, цистицерк, дирофилярия, аскариды, токсокара, парагонимус и др.). Техника исследования обычная; в некоторых случаях из тканей опухоли готовят гистологические срезы. Гнойное содержимое можно обработать методом Телеманна; прозрачную жидкость исследуют также, как и дуоденальное содержимое, добавляя серный эфир. Эхинококковую жидкость центрифугируют и исследуют осадок на наличие сколексов и крючьев; препараты окрашивают карболфуксином по Цилю-Нельсену.

Исследование крови. В крови обнаруживают микрофилярий и личинок мигрирующих нематод. Каплю крови берут из пальца или из мочки уха и исследуют в свежем виде или готовят из нее препараты.

Каплю крови помещают на предметное стекло с нанесенным квадратом из вазелина и слегка прижимают покровным стеклом. Под микроскопом видны микрофилярии, двигающиеся между клетками крови. Кровь можно помещать между двумя слоями клейкой целлюлозной ленты; микрофилярии сохраняют подвижность в течение 6 час.; в полностью высохшем препарате их можно различить под микроскопом в течение 30 дней. Идентифицировать виды микрофилярий можно лишь в окрашенных мазках или толстых каплях. Приготовленные препараты высушивают, гемолизируют и окрашивают по Романовскому - Гимзе, Райту, Цилю-Нельсену, Лейшману, Папаниколау (см. Райта метод окраски, Романовского-Гимзы метод, Циля-Нельсена метод). Обнаружив микрофилярий в капле крови, окрашенной по Романовскому-Гимзе, препарат дополнительно окрашивают гематоксилином Хансена; через 15-60 мин. промывают 2 мин. в проточной воде. Перекрашенный препарат дифференцируют в 0,2% растворе соляной к-ты; чехлик микрофилярий окрашивается в бледнофиолетовый цвет, а ядерная субстанция тела - в темно-фиолетовый.

При слабых инвазиях необходимо исследовать 2-10 лед крови с анти-коагулянтом (напр., с 5% раствором лимоннокислого натрия) одним из следующих методов.

Метод Кнотта (J. Knott, 1939), модифицированный Маркеллом и Фоге (Е. К. Markell, М. Voge, 1965). 2 мл крови перемешивают в центрифужной пробирке с 10 дел 1% уксусной к-ты, центрифугируют в течение 2 мин. при 1500 об/мин; поверхностный слой сливают, осадок распределяют на нескольких предметных стеклах и исследуют под микроскопом. Препараты можно окрашивать по Романовскому-Гимзе или другими методами.

Метод фильтрации Белла (D. R. Bell, 1967). В аппарате, состоящем из воронки из нержавеющей стали с прямоугольным отверстием и мембранных фильтров той же формы, размером 19 х 42 мм, с величиной пор от 0,8 до 5 мкм, фильтруют в пробирки кровь, гемолизированную в смеси из 1 мл детергента типола и 9 мл физиол, раствора (для ускорения фильтрации аппарат соединен с вакуумным насосом). Фильтр фиксируют в кипящей дистиллированной воде и окрашивают по Романовскому-Гимзе или горячим гематоксилином Эрлиха. Окрашенный фильтр высушивают в эксикаторе или в изопропиловом спирте (последовательно в 3 чашках), просветляют на стекле иммерсионным маслом и исследуют под покровным стеклом. Окрашенные препараты сохраняются несколько недель. Метод Белла наиболее эффективен для количественного учета микрофилярий в крови.

Применяется также метод с поливидоном Голдсмида.

Исследование кожи. В коже можно обнаружить микрофилярий онхо-церков и личинок гельминтов животных, вызывающих кожную форму larva migrans (см.). Срезы кожи или материал, полученный скарификацией, берут в области бедра, икры, ягодицы или на уровне дельтовидной мышцы. Конусообразный кусочек эпидермиса поднимают энтомологической булавкой и, срезав бритвой, исследуют на стекле в капле физиол, раствора. При отрицательном результате свежий препарат повторно просматривают через 10 мин.; личинки обычно локализуются по краям препарата. Полученный материал можно выдерживать в 2 мл физиол, раствора в течение 1-2 час. и исследовать осадок. Рекомендуют брать у больного 5 срезов кожи.

Можно готовить препараты и из крови и тканевой жидкости, выделившихся после сильного сжатия срезов. Капли окрашивают по Майеру, Романовскому-Гимзе или гематоксилином Делафильда.

Стандартный метод количественного учета инвазии. Биопсированный участок кожи диам. 3-5 мм и весом не менее 1-4 мг взвесить, разрезать на мелкие кусочки и подсчитать личинки под микроскопом в физиол. растворе на предметном стекле; 1-4 личинки в поле зрения обозначают знаком +, 5-9 личинок - знаком ++ , 10-19 - знаком +++, 20 и более - знаком + + + +. Количественный учет удобнее проводить на окрашенных препаратах.

Исследование на трихинеллез, цистицеркоз и Шистосоматозы

Выявление личинок трихинелл

Компрессионный метод. Кусочек двуглавой или икроножной мышцы (вблизи сухожилия), взятой хирургическим путем с соблюдением асептики, расщепляют препаровальными иглами на отдельные тонкие волоконца, сдавливают их между двумя предметными стеклами в капле глицерина так, чтобы препарат был тонким и прозрачным. Под микроскопом с затемненным полем зрения хорошо видны личинки трихинелл. Эффективно исследование нескольких кусочков мышц в компрессориумах, используемых в вет.-сан. практике, особенно в специальных трихинеллоскопах.

Метод переваривания Бечмена (G. W. Bachman, 1928). 1 а измельченных мышц заливают 60 мл искусственного желудочного сока (0,5 г пепсина; 0,7 мл концентрированной соляной к-ты; 100 мл воды) и выдерживают 18 час. в термостате при t° 37°; верхний слой жидкости сливают, к осадку добавляют теплой воды (t° 37-45°) и выливают в аппарат Берманна. Через час жид-, кость спускают в пробирку, центрифугируют и исследуют осадок. Если личинки заключены в обызвествленные капсулы, их предварительно декальцинируют в растворе соляной, азотной, или серной к-ты.

Биопроба . Кусочки исследуемых мышц скармливают белым мышам или крысам. Через 2-3 дня можно обнаружить половозрелых трихинелл в дуоденальном содержимом, а через 2-3 нед.- личинок в мышцах диафрагмы и языка.

Гистологические срезы. Кусочки мышц фиксируют в жидкости Буэна, Ценкера или др.; обычным способом готовят срезы на микротоме и окрашивают их гематоксилином Делафильда.

Выявление цистицерков

Кусочек экстирпированной мышцы, соединительной ткани и пр. осматривают невооруженным глазом, осторожно выделяют цистицерк - беловатый полупрозрачный пузырек размером 1-2 см, раздавливают его между двумя предметными стеклами в капле глицерина и исследуют под микроскопом. Для определения жизнеспособности выделенных из тканей цистицерков их выдерживают в 50% растворе желчи на физиол. растворе в термостате при t° 37°; через 10-60 мин. головка жизнеспособного цистицерка выворачивается наружу. Обызвествленных цистицерков предварительно декальцинируют 4% раствором азотной к-ты в течение часа.

Выявление яиц шистосом

При хрон, формах шистосоматозов, когда образование гранулем препятствует выходу яиц из тканей в просвет кишечника или в мочевыводящие пути, применяют биопсию слизистой оболочки прямой кишки, к-рую производят специальной ложкой при помощи ректоскопа, выбирая участок с видимым поражением. Биопсированный кусочек раздавливают между двумя предметными стеклами и исследуют под микроскопом. При отрицательном результате кусочки просветляют в 4% растворе едкой щелочи и готовят из них гистол. срезы. Биопсию слизистой оболочки тощей кишки производят перорально и полученный материал исследуют комперссионным методом или готовят из него гистол, срезы. В ряде случаев моче-полового шистосоматоза диагноз может быть поставлен только на основании эндовезикальной биопсии. При гепатолиенальной форме шистосоматоза производят пункционную биопсию печени; из полученного материала готовят гистол, срезы и исследуют их под люминесцентным микроскопом. Люминесцентный микроскоп с темным полем использования и для исследования тканей печени на яйца шистосом. При поражении шистосомами женских половых путей выделения собирают при помощи влагалищного зеркала или берут острой ложечкой кусочки слизистой оболочки шейки матки; полученный материал исследуют под микроскопом на стекле в капле физиол, раствора.

Исследование на энтеробиоз и тениидозы

Перианальный соскоб (рекомендуется брать вечером, через 1 - 1,5 часа после того, как пациент лег спать, или утром до совершения туалета). Спичкой, срезанной наискось и смоченной в капле жидкости (физиол, раствор, кипяченая вода или 2% раствор двууглекислой соды), нанесенной на предметное стекло, осторожно делаю? соскоб со слизистой оболочки ануса и складок вокруг него (от центра кнаружи). Собранную на конце спички слизь счищают краем покровного стекла в каплю жидкости на предметном стекле и, покрыв этим же покровным стеклом, исследуют. При массовых обследованиях, когда соскобы берут в детских или других учреждениях, использованную спичку помещают в каплю жидкости на предметном стекле, после подсыхания капли покрывают другим предметным стеклом и доставляют в лабораторию, завернув в бумагу и закрепив резинкой. Для исследования ректальной слизи пользуются специальным прибором - трубочкой Шахматова или Циманна, с помощью которых берут слизь из прямой кишки и исследуют мазки под микроскопом.

Метод с ватным тампоном. Пациентам на дом выдают пробирку с ватным тампоном на стеклянной или деревянной палочке; утром пациент протирает перианальные складки тампоном, Смоченным кипяченой водой, и помещает его в пробирку с небольшим количеством воды. В лаборатории тампоны прополаскивают в той же пробирке с новой порцией воды и осадок исследуют после центрифугирования.

Целлофановый метод Холла (М. С. Hall, 1937). Квадратный кусочек целлофана укрепляют резинкой на стеклянной палочке. Соскоб делают сухим целлофаном и помещают его в пробирку. В лаборатории целлофан слегка сдвигают с палочки и, срезав его кончик ножницами, расправляют на предметном стекле; смочив децинормальным раствором едкого натра, покрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом.

Метод с целлюлозной лентой Грэма (С. F. Graham, 1941). Полоску целлюлозной ленты прижимают клейкой стороной к перианаль-ным складкам обследуемого, затем той же стороной к предметному стеклу и исследуют без покровного стекла; можно добавлять каплю толуена. В. В. Каледин (1972) для этих целей предложил применять целлулоидные диски, вырезанные из отмытой рентгеновской пленки и смоченные глицерином; диски исследуют на предметном стекле в капле силикатного клея. Методом с целлюлозной лентой можно исследовать также нательное белье детей.

Подногтевой соскоб. Края ногтя, ногтевое ложе, подногтевые пространства смачивают 0,5-1% раствором едкой щелочи и протирают влажными ватными тампончиками. Тампоны помещают в центрифужные пробирки с этим же раствором, центрифугируют и исследуют осадок.

Методы исследования объектов окружающей среды на яйца и личинки гельминтов (санитарно-гельминтологические исследования)

Исследования проводят с целью определения степени загрязненности яйцами и личинками гельминтов объектов внешней среды. Полученные данные используют для оценки сан. состояния учреждений и предприятий и эффективности проводимых мероприятий по борьбе с гельминтозами.

При изучении степени загрязненности различных объектов окружающей среды яйцами и личинками гельминтов и оценки их роли в эпидемиологии гельминтозов важно установить не только число найденных яиц, но и их жизнеспособность и инвазионность, которые определяют: а) по внешнему виду, под микроскопом; б) окрашиванием различными красителями, в т. ч. люминесцентными; как правило, живые яйца и личинки не окрашиваются; в) культивированием в оптимальных условиях до инвазионной стадии; г) заражением лабораторных животных (биопроба).

Исследования воды и канализационных стоков. Для одного исследования используют 10-25 л воды (рек, морей, прудов, купальных бассейнов, водопровода) и 1-2-5 л канализационных стоков.

Метод 3. Г. Васильковой (1941). Воду или канализационные стоки фильтруют через мембранные ультрафильтры в аппарате Гольдмана, состоящем из стеклянной или металлической воронки с фильтрами, соединенной при помощи кольца-насадки с колбой Бунзена. Для ускорения процесса фильтрации к аппарату подключают вакуумный насос. После фильтрации мембранные фильтры просматривают под микроскопом, просветлив их 50% раствором глицерина; скопившийся осадок счищают и просматривают отдельно в виде мазков. Применяются фильтровальные аппараты и других конструкций.

Метод Г. Ш. Гуджабидзе и Г. А. Юдина (1963) для исследования канализационной жидкости. 1 л жидкости отстаивают 2 часа в цилиндре Лисенко; полученный осадок (5-9 мл) обрабатывают, как при исследовании почвы (см. ниже).

Метод Н. А. Романенко (1967). К 1л сточной жидкости, помещенной в стеклянный цилиндр емкостью 1200-1500 мл, добавляют 0,4-0,6 г сернокислого алюминия или хлорного железа (с целью коагулирования, ускоряющего процесс осаждения взвешенных частиц) и через 40 мин. смесь центрифугируют 3 мин. при 1000 об/мин; верхний слой сливают, а для растворения хлопьев добавляют 1-2 мл 3% раствора соляной к-ты, затем 150 мл насыщенного раствора азотнокислого натрия. Осадок исследуют, как почву.

Исследование почвы

Загрязненность почвы яйцами гельминтов определяют с целью выявления очагов гельминтозов и оценки эффективности работы по их оздоровлению.

Метод 3. Г. Васильковой и В. А. Гефтер (1948). 12,5 г почвы смешивают в пробирках (объемом 100 мл) из нержавеющей стали или латуни с 20 мл 5% раствора едкой щелочи, добавив 10 стеклянных бусинок или мелких камешков. Пробирки закрывают резиновыми пробками и встряхивают в течение 20 мин. в аппарате для встряхивания или вручную. Вынув пробки, пробирки центрифугируют 3-5 мин., поверхностную жидкость сливают, к осадку добавляют 60-80 мл насыщенного раствора азотнокислого натрия и, тщательно перемешав, вновь центрифугируют 3-5 мин. В сю поверхностную пленку со всплывшими яйцами снимают, прикасаясь к поверхности смеси сложной петлей (5-6 петель, соединенных на общем стержне), и переносят в стаканчик с водой; перемешивают с тем же раствором, центрифугируют; всю процедуру повторяют не менее 3 раз. Содержимое стаканчика, куда переносят пленку, разбавляют водой и фильтруют через мембранные фильтры, которые исследуют под микроскопом в капле глицерина.

Метод 3. Г. Васильковой и В. А. Гефтер в модификации А. А. Намитокова (1961) отличается от основного метода тем, что вместо исследования препаратов пленки используют половину содержимого пробирки (каждый раз добавляя новую порцию насыщенного раствора азотнокислого натрия), фильтруют и исследуют фильтры.

Н. А. Романенко (1968) рекомендует исследовать на яйца гельминтов пробы почвы и осадка сточных вод с помощью аппарата, предложенного Г. Ш. Гуджабидзе. 50 г почвы тщательно перемешивают в течение 1 мин. в 150 мл воды в центрифужных пробирках (емкостью 250 мл) специальными лопастями, которые приводятся в действие электромотором. Смесь центрифугируют 3 мин. при 1000 об/мин, воду сливают и, добавив 150 мл насыщенного раствора азотнокислого натрия, перемешивают и снова центрифугируют 3 мин. Пробирки с пробами устанавливают в штатив, доливают раствор азотнокислого натрия до образования выпуклого мениска, покрывают предметными стеклами (10 х 6 см) и отстаивают 10-15 мин., затем стекла снимают и исследуют; процедуру повторяют не менее 4 раз.

Исследование на личинки гельминтов по методу Берманна (1917). 200-400 г почвы помещают в кусочке марли на металлическую сетку (с диам, отверстий 1-2 мм), надетую на широкую часть стеклянной воронки, укрепленной в штативе. На узкий конец воронки натянута резиновая трубка с зажимом. Воронку наполняют теплой (t° 50°) водой так, чтобы нижняя часть сетки с почвой соприкасалась с водой. В силу термотропности личинки активно выползают в теплую воду и, оседая, скапливаются в нижней части резиновой трубки над зажимом. Через 3-4 часа из воронки выпускают в пробирку 50 мл содержимого, центрифугируют и исследуют осадок.

Исследование овощей, фруктов и ягод

Исследуют преимущественно овощи, ягоды и фрукты, употребляемые в пищу без термической обработки. Метод 3. Г. Васильковой (1948). По 5-10 штук овощей или фруктов (ок. 0,5 кг) или 100- 200 г зелени (салат, зеленый лук) заливают на несколько часов водой в широкогорлых стеклянных банках с притертыми пробками и встряхивают 10-20 мин. в аппарате для встряхивания или вручную. Воду сливают, исследуемые объекты прополаскивают чистой водой и всю смывную воду фильтруют в аппарате Гольдмана; фильтры исследуют, просветлив глицерином. Можно подкрашивать фильтры 25% раствором Люголя в глицерине; при этом яйца гельминтов окрашиваются в коричневый цвет и их легко распознать среди крахмальных зерен, окрашенных в синий цвет. Большой осадок обрабатывают, как почву.

Исследование смывов с предметов обихода и с рук. Кисточкой для клея (или ватным тампоном, обернутым кусочком капроновой ткани), смоченной в 2% растворе двууглекислой соды, многократно проводят по обследуемому предмету или рукам, после чего ополаскивают в том же растворе, налитом в пробирку. В лаборатории кисточки и тампоны прополаскивают чистой водой; все смывные воды центрифугируют и исследуют осадок.

Метод В. А. Гефтер (1960). Пыль с мягкого инвентаря эффективнее собирать при помощи пылесоса, подключенного к воронке, к-рая состоит из 2 разъемных частей: на поверхность нижней части, покрытой металлической или пластмассовой сеткой, помещают мембранный фильтр и укрепляют его, надев верхнюю часть воронки. Собранную воронку присоединяют к шлангу пылесоса резиновой трубкой. Пыль с предмета собирают в течение 3 мин., после чего фильтр вынимают и заменяют новым. В лаборатории фильтры просматривают под микроскопом, просветлив их глицерином. Если слой пыли на фильтре велик, его соскабливают и просматривают в виде мазков или обрабатывают, как почву.

Иммунологические методы диагностики

Возможность использования иммунол. методов для диагностики гельминтозов обусловлена способностью гельминтов продуцировать активные антигены, воздействующие на иммунокомпетентные клетки хозяина и стимулирующие продукцию антител. Наиболее эффективны иммунодиагностические методы при кишечных гельминтозах, когда секреты и экскреты гельминтов, обладающие антигенной активностью, попадают непосредственно в кровь хозяина. Иммунол, реакции используют для диагностики аскаридоза, трихинеллеза, филяриатозов, шистосоматозов, эхинококкоза и альвеококкоза, цистицеркоза, парагонимоза, симптомокомплекса larva migrans- (токсокароз, ангиостронгилез) и др. Применяют различные серол, тесты (реакции преципитации, агглютинации, связывания комплемента, флюоресцирующих антител) и внутрикожные аллергические пробы. Антигены готовят из личинок и половозрелых гельминтов, используя солевые экстракты гомогенатов свежезамороженных или лиофилизированных тканей, а также разные биологически активные жидкости (жидкость из эхинококковых пузырей, полостную жидкость аскарид и др.). В связи с тем что гельминты обладают весьма сложной антигенной структурой и в их антигенной мозаике имеются компоненты и отдельные детерминанты, перекрестно реагирующие с другими видами гельминтов, бактериями, антигенами хозяина, разрабатываются методы очистки их от неспецифических компонентов. Фракционирование проводят разными методами: гель-фильтрацией в колонках с сефадексами, ионообменной хроматографией на ДЕАЕ-сефадексе, обработкой кислотами и др. Фракционные антигены обладают обычно более высокой специфичностью, чем цельные экстракты, активность же их приблизительно одинакова. Иммунодиагностические методы находят все большее применение. Реакции используют не только для наиболее полного и раннего выявления больных, но и для исследования очагов и изучения эпидемиологии гельминтозов.

Серологические реакции. Реакцию микропреципитации на живых личинках применяют для диагностики нематодозов - преимагинальной фазы аскаридоза, анкилостомидозов, трихинеллеза. Реакция становится положительной через 5- 10 дней после заражения (аскаридозом, анкилостомидозами) и сохраняется в течение 90-100 дней. Антигеном служат живые личинки нематод, выделенные из тканей экспериментально зараженных лабораторных животных. Выделенных личинок тщательно отмывают от белков хозяина стерильным физиол, раствором и дистиллированной водой и по 10-15 экз. помещают с помощью пастеровской пипетки на стерильное предметное стекло с луночкой. Наносят 2-3 капли испытуемой сыворотки, накрывают стерильным покровным стеклом, заключают во влажную камеру (чашка Петри, выстланная увлажненной фильтровальной бумагой) и выдерживают 24-48 час. в термостате при t° 37°. При положительной реакции под малым увеличением микроскопа видны вокруг ротового и анального отверстий личинок серовато-белые, слегка опалесцирующие массы преципитатов шаровидной или зигзагообразной формы. Эффективность реакции достигает 85-95% .

Реакция кольцепреципитации разработана В. П. Пашуком (1957) для диагностики трихинеллеза. Реакция становится положительной на 2--3-й неделе болезни. Эффективность ее достигает 80-90% . Антигеном служит экстракт порошка из высушенных при t° 35° личинок, выделенных из мышц зараженных животных. В пробирки диам. 0,5 см наливают по 0,1 мл каждого разведения антигена и осторожно наслаивают на него (или опускают на дно) равное количество испытуемой сыворотки так, чтобы жидкости не смешивались. Пробирки выдерживают 30 мин. в термостате при t° 37°, а затем 30- 60 мин. при комнатной температуре. При положительной реакции на границе соприкосновения антигена и сыворотки появляется беловатое нежное кольцо, легко распадающееся при встряхивании.

Реакция преципитации в геле по Оухтерлоню (О. Ouchterlony, 1949) в микромодификации А. И. Гусева и В. С. Цветкова предложена И. А. Гиновкер, Е. А. Забозлаевой, А. В. Дорониным (1970) для диагностики ранней фазы описторхоза. По предварительным данным, ее эффективность 87%. Антигеном служит экстракт гомогената свежезамороженных половозрелых описторхисов, выделенных из печени кошек.

Реакция непрямой гемагглютинации (см.) с диагностикумом - взвесью формалинизированных и танизированных эритроцитов барана, сенсибилизированных эхинококковой жидкостью,- разработана

Л. Н. Степанковской (1972) для диагностики эхинококкоза и альвеококкоза.

РНГА с диагностикумом из формалинизированных эритроцитов барана, сенсибилизированных экстрактом гомогената свежезамороженных цистицерков свиного цепня, предложена Л. М. Коноваловой (1973) для диагностики цистицеркоза мозга; она эффективна в 85% случаев.

РНГА с аскаридным диагностикумом предложена для диагностики преимагинальной фазы аскаридоза.

Реакция связывания комплемента (см.) ставится по обычной методике и используется для диагностики трихинеллеза и цистицеркоза.

Метод люминесцирующих антител (непрямой метод). Этот метод с обезжиренным сухим гомогенатом цистицерков свиного цепня в качестве антигена, фиксированным на предметном стекле, разработан JI. М. Коноваловой (1973) для диагностики цистицеркоза человека. Та же реакция с гистол, срезами личинок трихинелл в качестве антигена разработана для диагностики трихинеллеза.

E. С. Лейкина, В. А. Гефтер.

Введение

Глава I. Классификация гельминтозов

Глава II. Патогенез гельминтозов

1 Основные фазы гельминтозов в патогенезе и клинике

2 Фактор воздействия возбудителя на иммунную систему хозяина

Глава III. Основные принципы диагностики гельминтозов

Глава IV. Макроскопические методы исследования

Глава V. Качественные методы исследования

1 Нативный мазок

2 Метод Като

3 Методы, основанные на принципе осаждения яиц

4 Методы обогащения, основанные на принципе всплывания яиц

5 Методика обнаружения яиц гельминтов в кале методом обогащения

6 Флотационные методы

7 Метод липкой ленты

Глава VI. Количественные методы исследования

1 Метод Столла

2 Метод Красильникова-Волковой

ГлаваЛАВА VII. Методы диагностики протозойных инвазий

1 Нативный мазок

Заключение

Список литературы

ВВЕДЕНИЕ

Развитие малого бизнеса в пищевой промышленности при недостаточном технологическом контроле привел к снижению качества и безопасности пищевой продукции. Появились незаконные точки убоя скота, подпольные производства мясопродуктов, не прошедших ветеринарный контроль. Ухудшению ситуации также способствует выдача сертификатов ветеринарного контроля на пищевую продукцию «на коммерческой основе», снижение качества профосмотров, прием на работу лиц без санитарных книжек.

Ежегодно в мире регистрируется рост численности домашних животных. По данным Российской Кинологической Федерации, около 5млн. породистых собак зарегистрировано в России. В целом, предположительно, в нашей стране около 30 млн. собак, к тому же многие из них безнадзорны. По данным различных исследований до 80% домашних собак заражены глистами. Проблема загрязнения окружающей среды фекалиями этих животных становится все более острой. Обследованиями, проведенными в различных странах, установлена значительная обсемененность почвы в населенных пунктах яйцами гельминтов с колебаниями до 60% положительных проб. Наиболее обсеменены яйцами гельминтов места около мусорных контейнеров, дворики, песочницы детских садов, рынки, ветлечебницы города, подвалы домов.

На сегодняшний день вследствие сложившейся проблемы большое значение имеет диагностика гельминтозов, что особенно важно на ранних этапах заболевания.

Целью нашей работы является теоретическое изучение методов современной диагностики самых распространенных гельминтозов, использующихся на сегодняшний день в клинической практике.

Задачи работы:

выявление наиболее эффективных методов исследования гельминтозов в клинической практике;

Знакомство со статистикой ВОЗ;

определение преимуществ и недостатков разнообразных методов;

выявление наиболее результативного методов;

изучение истории развития гельминтозов

изучение применяющихся и перспективных методов выявления гельминтозов.

ГЛАВА I. КЛАССИФИКАЦИЯ ГЕЛЬМИНТОЗОВ

Во вторую группу входят гельминты (трихинеллы, трематоды), заражение которыми может произойти через мясо животных и рыбу.

Гельминты при питании выделяют в организме хозяина ядовитые вещества, которые мгновенно всасываются в кровь, разносятся по тканям хозяина, воздействуя на его нервную систему и все жизненно важные органы. .

Гельминтозы характеризуются развитием яиц и личинок возбудителей только во внешней среде без участия промежуточных хозяев. Развитие яиц геогельминтов происходит в почве или на овощах и определяется такими факторами, как температура, влажность и аэрация почвы.

Тениидозы - заболевания, связанные с употреблением мясного сырья. При данных заболеваниях человек является окончательным хозяином гельминтов и единственным источником инвазии. Человек заражается при употреблении в пищу мяса, инфицированного личиночной стадией биогельминта. Известны две разновидности цепня: бычий цепень и свиной. При употреблении мяса, зараженного личинками бычьего цепня, у человека развивается заболевание, называемое тениаринхозом. При употреблении мяса, зараженного личинками свиного цепня, развивается тениоз.

Трихинеллез - биогельминтоз, характеризующийся лихорадкой, мышечными болями и аллергическими проявлениями. Заражение человека происходит при употреблении мяса, содержащего инкапсулированные личинки трихинелл.

Дифиллоботриоз - биогельминтоз, характеризующийся поражением желудочно-кишечного тракта и имеющий хроническое течение. Заражение человека происходит при употреблении в пищу недостаточно термически обработанной или малосоленой рыбы и икры, содержащей личинки лентеца.

Описторхоз - биогельминтоз, характеризующийся поражением печени, поджелудочной железы и имеющий хроническое течение. Заражение человека происходит при употреблении малосоленой, слабо провяленной, сырой или недостаточно термически обработанной рыбы, содержащей личинки кошачьей двуустки.

Геогельминтозы - это гельминтозы, возбудители которых проходят развитие без участия промежуточного хозяина. Выделившиеся из организма яйца или личинки геогельминтов развиваются до инвазионной стадии в почве. Представители живой природы (биотическая среда) здесь могут играть только роль механических переносчиков инвазионных личинок. Например, мухи случайно могут переносить яйца или личинок на хоботке или ножке. К геогельминтозам относятся: аскаридоз, трихоцефалез, анкилостомидозы, стронгилоидоз и другие заболевания. ах, собаки - на конечностях, волосах.

ГЛАВА II. ПАТОГЕНЕЗ ГЕЛЬМИНТОЗОВ

По мнению экспертов ВОЗ, гельминтозы в настоящее время в какой-то мере стали «забытыми болезнями» - во всем мире наблюдается недооценка их медико-социальной значимости. Даже в эндемичных странах им уделяется недостаточное внимание, как со стороны органов здравоохранения, так и населения.

2.1 Основные фазы гельминтозов в патогенезе и клинике

В патогенезе и клинике гельминтозов выделяют две основные фазы: острую - первые 2-3 нед после инвазии, а при тяжелом течении - до 2 мес и более, и хроническую - длительностью от нескольких месяцев до многих лет.

.2 Фактор воздействия возбудителя на иммунную систему хозяина

Фактор воздействия возбудителя на иммунную систему «хозяина» продолжает играть значительную роль и в хронической фазе инвазии. Одной из важных причин органных и системных поражений, особенно при тканевых гельминтозах, является образование иммунных комплексов, которые активизируют медиаторные системы (комплемента, цитокинов и др.). Наряду со стимуляцией иммунного ответа гельминты оказывают иммуносупрессивное действие, что способствует их выживанию в организме хозяина. Состояние иммунодефицита при гельминтозах отрицательно влияет на резистентность человека к бактериальным, вирусным и другим инфекциям, способствует их затяжному течению и формированию носительства, снижает эффективность профилактических прививок. Это хорошо показано на частоте брюшнотифозного носительства, заболеваемости туберкулезом и другими хроническими инфекционными болезнями среди населения гиперэндемичных очагов описторхоза.

При клинически манифестных формах гельминтозов первые признаки появляются в разные сроки после заражения: при аскаридозе проявления острой фазы наблюдаются уже на 2-3-й день, при большинстве других гельминтозов - через 2-3 нед, при филяриозах инкубационный период длится 6-18 мес. В ранней острой фазе гельминтозов характерны проявления аллергических реакций: лихорадка, рецидивирующие зудящие высыпания на коже, отеки - от локальных до генерализованных, увеличение лимфатических узлов, миалгия, артралгия, в периферической крови - лейкоцитоз с гиперэозинофилией. На этом фоне нередко развиваются легочный синдром (от незначительных катаральных явлений до астмоидных состояний, пневмонии и плеврита) и абдоминальный синдром (боли в животе и диспептические расстройства). Увеличиваются в размерах печень и селезенка, возможны разной степени выраженности симптомы и синдромы поражения центральной нервной системы (ЦНС). При некоторых гельминтозах наблюдаются также специфические признаки: при трихинеллезе в типичных случаях с первых дней болезни наблюдается симптомокомплекс, включающий лихорадку, боли в мышцах, отек век и лица; при трематодозах печени (описторхоз, фасциолез) - желтушный синдром, увеличение печени и селезенки. Даже среди гельминтозов, вызванных близкими видами возбудителей, отмечаются существенные различия в тяжести течения и характере проявлений острого периода: так, при японском шистосомозе он развивается намного чаще и протекает тяжелее, чем при мочеполовом и кишечном шистосомозах.

Большим полиморфизмом клинических проявлений характеризуется стронгилоидоз, при котором наряду с разнообразными аллергическим и диспептическим симптомами у больных нередко наблюдаются признаки нарушения функции желчевыводящих путей. При трематодозах печени (описторхоз, клонорхоз, фасциолез) развиваются хронический холецистохолангит, гепатит, панкреатит, возможны поражения различных отделов желудочно-кишечного тракта, наблюдаются также неврологические нарушения. Характерным признаком мочеполового шистосомоза является «терминальная гематурия» (появление капельки крови в конце мочеиспускания) и дизурические расстройства. У больных филяриозами в той или иной степени выражен аллергический синдром, для лимфатических филяриозов (вухерериоз и бругиоз) характерны лимфоаденопатия, лимфангит и лимфостаз, при онхоцеркозе наряду с этими симптомами отмечаются серьезные поражения глаз.

Кишечные цестодозы (дифиллоботриоз, тениаринхоз, тениоз, гименолепидоз) во многих случаях протекают бессимптомно, проявляясь только отхождением зрелых члеников гельминта при дефекации или самостоятельно (только при тениаринхозе). У больных дифиллоботриозом развивается анемия, обусловленная дефицитом витамина В12. Среди гельминтозов особое место занимают ларвальные цестодозы: эхинококкоз, альвеококкоз, цистицеркоз. Они также могут длительное время протекать бессимптомно даже при наличии кист довольно крупных размеров. В то же время разрыв или нагноение даже небольшого эхинококкового пузыря ведет к тяжелым последствиям: развитию анафилактического шока, гнойного перитонита, плеврита и т. п. В результате сдавливания растущим пузырем или альвеококком портальной и нижней полой вены развивается портальная гипертензия со всеми характерными проявлениями и последствиями.

Цистицеркоз ЦНС протекает в виде церебрального, спинального поражений с соответствующей разнообразной симптоматикой; локализация гельминта в желудочках мозга сопровождается признаками внутричерепной гипертензии. Токсокароз, регистрируемый в нашей стране преимущественно у детей, клинически выражается абдоминальным, легочным синдромами, неврологическими нарушениями, поражением глаз, выраженной эозинофилией в периферической крови. .

В последние годы в изучении механизмов развития патологического процесса при гельминтозах достигнуты большие успехи.

ГЛАВА III. ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ ДИАГНОСТИКИ ГЕЛЬМИНТОЗОВ

По данным ВОЗ, точность диагнозов по анализам кала не превышает 5-10%.

Основным методом лабораторной диагностики этих инвазий является обнаружение яиц или личинок гельминтов.

Испражнения для анализов должны доставляться в лабораторию не позднее одних суток после их выделения, а при подозрении на стронгилоидоз - немедленно

В настоящее время преобладают малоинтенсивные инвазии, особенно при геогельминтозах, поэтому при копроовоскопии необходимо пользоваться методами обогащения.

Однако во главу диагностики еще до лабораторного обследования должны быть поставлены обязательные сведения, полученные при изучении у больного эпидемиологического, географического, социального анамнеза и анамнеза болезни.

Несмотря, на первый взгляд, казалось бы бессимптомное течение многих глисто-протозойных инвазий, у большенства инвазированных при тщательном врачебном обследовании удается выявить немаловажную симптоматику.

Поэтому результаты опроса больного, наиболее полные анамнестические данные, наличие даже легкой симптоматики в большинстве случаев на 79-80%вероятности определяют возможность постановки диагноза при таких инвазиях, как энтеробиоз, тениидозы, дифиллоботриоз, нередко при аскаридозе и описторхозе. А самое главное эти данные определяют конкретные показания к проведению лабораторной диагностики: правильному выбору методики, соответствующей подготовки больного, забору для исследования необходимого биологического материала (жидкостей или экскретов).

Большой популярностью среди основных методов исследования на сегодняшний день используются иммунологические методы диагностики, а также ПЦР - для выявления ДНК возбудителей. Иммунологические методы диагностики гельминтозов основаны на обнаружении в сыворотке крови специфических антител к тем или иным гельминтам. Для иммунологического исследования применяется метод непрямой гемагглютинации, иммуноферментного анализа, иммуноэлектрофореза, иммуноабсорбции и другие серологические методы исследований крови.

Иммунологические методы исследования применяются для диагностики альвеококкоза, эхинококкоза, цистицеркоза, аскаридоза, шистосомоза и других гельминтозов как вспомогательные в комплексе с методами клинико-инструментальной диагностики. Данные методы исследования можно считать эффективными только в том случае, когда гельминты располагаются непосредственно в тканях человеческого организма.

Биологическим материалом для исследований на наличие гельминтов, их фрагментов, личинок и яиц служат фекалии, моча, дуоденальное содержимое, желчь, мокрота, ректальная и перианальная слизь, кровь, мышечная ткань. С учетом преобладающей локализации большинства наиболее распространенных гельминтов в желудочно-кишечном тракте, чаще всего объектом исследования являются фекалии. Макроскопические методы применяют для обнаружения выделенных гельминтов или их фрагментов: головки, обрывки стробилы или отдельные членики. Целью микроскопических исследований является обнаружение яиц и личинок. В настоящее время рекомендованы к применению толстый мазок по Като-Миура, методы седиментации, методы флотации.

Нативные и концентрированные препараты фекалий: яйца гельминтов-аскарид, власоглава, карликового цепня, широкого лентеца, токсокар, трематод -кошачьей, сибирской двуусток, и т. д.

В нативных необработанных фекалиях или жидких при промывании невооруженным глазом можно обнаружить целых или фрагменты взрослых аскарид, остриц, членики бычьего цепня, свиного цепней, отрывки стробилы широкого лентеца.

В пробах мочи: яйца шистосом, трихомонады, яйца диактофим, дочерние капсулы эхинококка, при эхинококкозе почек.

В соскобах кожи с перианальной области: яйца остриц, яйца (онкосферы) теннид.

В мокроте: личинки стронгилид, аскарид, токсокар, дочерние капсулы эхинококка при эхинококкозе легких, амебы при легочном амебиазе.

В пробах дуоденального содержимого (двенадцатиперстной кишки): личинки и даже яйца стронгилид, трофозоиды лямблии, яйца трематод(кошачьей, китайской, печеночного, ланцетовидной двулисток).

В пробах спинномозговой жидкости: трипаносомы, личинки нематод ангиостронгилид.

В мазках из влагалищной слизи: трихоманады, трофозоиты кишечной амебы, иногда яйца остриц и даже взрослой особи.

В молоке матери в особых случаях: личинки стронгилид.

Нативные тканевые препараты (аспирационный материал из бронхов, костного мозга, лимфатических узлов, абсцессов, соскобы со слизистых, биопсия) путем обработки специальными методами применяется в дополнение или взамен гистологических исследований для диагностики трипаносомоза, пневмоцистоза, трихинеллеза.

Кал для анализа кала на обнаружение гельминтов необходимо собирать правильно, следуя рекомендациям:

Перед сбором воспрещено делать клизму и употреблять любые слабительные средства;

При дефекации кал следует собирать на полиэтиленовую пленку или в лоток. При этом нельзя допускать попадания на образец мочи, выделений, воды, предметов личной гигиены и пр. ;

Если в лабораторию анализы сразу отправить не получается, то хранить материал необходимо при температуре 4-8 градусов Цельсия. При этом в лабораторию анализы должны попасть в этот же день.

По возможности следует собрать несколько образцов кала, из разных дефекаций в течение одного дня.

ГЛАВА IV. МАКРОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Осмотр фекалий при помощи лупы или невооруженным глазом.

Ход исследования. Фекалии размешивают с водой до получения равномерной суспензии, после чего при освещении тщательно просматривают небольшими пропорциями в черных фотографических кюветах или на темном фоне в чашках Петри. В случае обнаружения подозрительных частиц или когда заведомо предполагают наличие мелких форм гельминтов (например остриц), все подозрительные белые частицы пинцетом или препаровальными иглами переносят на предметное стекло в каплю глицерина, изотонического раствора хлорида натрия или воды и исследуют невооруженным глазом под лупой или под микроскопом. При обнаружении подозрительных образований, следует рассмотреть их под лупой, предварительно сжав их между двумя предметными стеклами.

Метод отстаивания. Ход исследования. Весь исследуемый материал (в данном случае свежих фекалий) помещают в высокие банки, разбавляют сильной струей воды и оставляют отстояться. Мутный слой над осадком с осторожностью переливают в другой сосуд, осадок вновь разбавляют и смесь отстаивают. Данные операции выполняются до тех пор, пока вода над осадком не станет прозрачной. Воду сливают, а осадок исследуют маленькими частями в чашках Петри на темном фоне.

Оценка полученных результатов. Дифференциальная диагностика между гельминтами основывается на их анатомо-морфологических признаках. Определение принадлежности нематод, как правило, возможно лишь по цельным особям, реже - по достаточно большим фрагментам, которые сохранили свои характерные диагностические признаки. Цестоды чаще всего диагностируют по зрелым или гермафродитным сколексам и членикам .

Микроскопические методы исследования

Целью микроскопических методов является выявление яиц и личинок гельминтов. Данные методы подразделяются на качественные и количественные.

ГЛАВА V. КАЧЕСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

.1 Нативный мазок

Метод предложенный Давеном в 1853г. - один из самых старых и самых простых методов данной группы, но в литературе имеются многочисленные высказывания, указывающие на его низкую эффективность, по сравнению с другими методами.

МЕТОДЫ ОБНАРУЖЕНИЯ ГЕЛЬМИНТОВ.

Аскаридоз можно обнаружить методами: копроовоскопические мазок на Като, унифицированные методы обогащения Фюллеборна, Калантарян и др. флотационные методики.

5.2 Метод Като

Метод Като (толстый мазок с целлофаном) - последователь нативного мазка. Данный метод очень удобен при массовых обследованиях, мазки могут быть приготовлены на месте. Этот метод основывается на выявлении гельминтов в просветленном глицерином и окрашенном малахитовой зеленью мазке фекалий. Чтобы осуществить этот метод, необходим целлофан смесь Като, состоящая из 6 миллилитров 3% раствора малахитовой зелени в воде, 500 миллилитров глицерина, 500 миллилитров 6% раствора фенола.

Ход исследования. Целлофановые полоски меньше предметного стекла вырезают из гидрофильного целлофата и предварительно обрабатывают, погружая их в раствор Като: глицерин размягчает целлофан, осветляет препарат и предохраняет его от высыхания; фенол используется для защиты лаборанта от патогенных бактерий; малахитовая зелень уменьшает напряжение глаз. Полоски располагаются в растворе Като так, что они прилежат друг к другу (3-5 мл на 100 полосок). Через 24 часа полоски готовы к дальнейшим действиям. Они могут очень продолжительное время храниться в указанной смеси, в герметичной посуде.

миллиграмм фекалий укладывают на предметное стекло толстым слоем, накрывают полоской целлофана и придавливают на предметном стекле резиновой пробкой таким образом, чтобы фекалии не выдавились из-под целлофана.

Исследование мазка следует проводить не позже чем через час после его приготовления. За небольшой промежуток времени (в течении часа) при комнатной температуре мазок становится более прозрачным.

При отсутствии реактивов для приготовления смеси Като ее можно заменить 50% водным раствором глицерина.

Выявление яиц проводится под микроскопом во всем толстом мазке.

Диагностическое значение. Наиболее эффективен метод Като для диагностики тениаринхоза. Так же можно выявить яйца аскарид, власоглавов, трематод и других. Но данный метод не эффективен в диагностике гименолепидоза, анкилостомидозов и трихостронгилоидоза.

.3 Методы, основанные на принципе осаждения яиц

Данные методы в настоящее время не рекомендуются в качестве унифицированного из-за малой их эффективности или громоздкости. Из этой группы методов выделяется метод исследования фекалий на яйца гельминтов с использованием синтетических детергентов (синтетических моющих средств типа «Лотос»). Под действием поверхностно-активных веществ, входящих в состав детергентов, яйца гельминтов освобождаются от кала и концентрируются в осадке.

В качестве реактива используют 1 % раствор стирального порошка (порошок высушивают в сушильном шкафу при 100 °С в течение 1-2 ч, 10 г порошка растворяют в 1 л водопроводной воды).

Существуют две методики:

методика - В склянку емкостью 30-50 мл наливают 20-30 мл раствора детергента, туда же помещают порцию кала размером с лесной орех. Кал для исследования желательно помещать в раствор детергента не позже чем через 1 ч после дефекации. Соотношение раствора и кала примерно 1: 2. Кал должен находиться в растворе не менее суток. За это время на дне флакона образуется двух-, трехслойный осадок. Нижний слой состоит из грубых тяжелых частиц, в среднем слое концентрируются яйца гельминтов, на которые иногда оседают легкие хлопья. Пастеровскую пипетку с высоко отбитым концом вводят в средний слой осадка, возможно более низко, но не касаясь дна склянки, набирают одну-три капли жидкости и переносят их на предметное стекло. Каплю накрывают покровным стеклом или целлофановой пластинкой по Като и исследуют под микроскопом. На одном стекле должно быть приготовлено два препарата.

методика - Кал помещают в раствор детергента в соотношении примерно 1: 10 и перемешивают до образования суспензии. Через 30 мин содержимое пробирки встряхивают 1-2 мин и центрифугируют 5 мин при 1000-1500 об/мин. Из осадка готовят два препарата на одном предметном стекле.

Просматривают под микроскопом полностью оба препарата, учитывая все обнаруженные яйца гельминтов.

Диагностическое значение: Данным методом можно выявить яйца всех видов гельминтов.

Метод Фюллеборна. Данный метод основан на всплывании яиц гельминтов в насыщенном растворе NaCl с высокой относительной плотностью. Для этого растворяют 400 г NaCl в 1 л воды при кипячении. Относительная плотность раствора 1, 18-1, 22. Раствор хранят в закрытой бутыли.

Для проведения анализа в банку объемом 30-50 мл помещают 2-3 г испражнений и при помешивании палочкой доливают почти доверху насыщенный раствор хлорида натрия. Полоской бумаги быстро удаляют всплывшие крупные частицы.

Через 45-60 мин. отстаивания проволочной петлей снимают поверхностную пленку и переносят ее на предметное стекло в каплю 50% водного раствора глицерина. Готовят несколько препаратов. Дополнительно просматривают 2-4 препарата из осадка, набирая его глазной пипеткой на 2 предметных стекла.

Необходимость исследования осадка обусловлена тем, что яйца трематод и тениид всплывают очень плохо и могут остаться в осадке. Хорошо всплывают яйца нематод (за исключением неоплодотворенных яиц аскарид), карликового цепня и лентеца.

К достоинствам этого метода относится его дешевизна и доступность к недостаткам - необходимость просмотра препаратов из поверхностной пленки и осадка, а также длительность отстаивания.

.4 Методы обогащения, основанные на принципе всплывания яиц

Методы этой группы основаны на всплывании яиц гельминтов в растворе, имеющем по сравнению с ними большой удельный вес.

Метод Калантарян. Кал суспензируютво флотационном растворе, имеющем большую относительную плотность, чем яйца гельминтов. При этом яйца гельминтов всплывают на поверхность, образовавшуюся пленку исследуют под микроскопом.

В качестве реактива используют флотационный раствор по Калантарян (1 кг нитрата натрия растворяют в 1 л воды, кипятят смесь до образования пленки и переливают без фильтрования в сухие бутылки; относительная плотность раствора 1, 38) либо флотационный раствор по Брудастову - Красноносу (900 г нитрата натрия и 400 г нитрата калия растворяют при подогревании в 1 л воды; относительная плотность раствора 1, 47-1, 48).

Недостаток метода - высокая стоимость азотнокислого натрия.

Метод Горячева. Данный метод(метод осаждения) используется для диагностики описторхоза. Удельный вес яиц описторха высок, поэтому они не всплывают в солевых растворах. В цилиндр диаметром 2-3 см наливают 70-100 мл насыщенного раствора хлорида натрия.

Отдельно тщательно размешивают 0, 5 г испражнений в 20-25 мл воды и осторожно фильтруют через воронку с двумя слоями марли в цилиндр на солевой раствор, избегая перемешивания. Яйца описторхов медленно оседают на дно цилиндра.

Через 2-3 часа верхний слой с калом отсасывают пипеткой, а оставшийся солевой раствор оставляют стоять на 12-20 часов или центрифугируют. Осадок пипеткой переносят на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Этот метод применим и для диагностики других трематодозов.

.5 Методика обнаружения яиц гельминтов в кале методом обогащения

В химических стаканах тщательно размешивают стеклянной палочкой 5-10 г кала и 100- 200 мл одного из флотационных растворов. Сразу же после окончания размешивания удаляют стеклянной палочкой всплывшие на поверхность крупные частицы. К поверхности солевого раствора прикладывают предметное стекло. Если между смесью и предметным стеклом остается пустое пространство, то добавляют солевой раствор до полного соприкосновения смеси с предметным стеклом.

Оставляют для отстаивания на 20-30 мин, после чего предметное стекло снимают, кладут под микроскоп пленкой кверху и просматривают без покровного стекла всю пленку, прилипшую к поверхности предметного стекла. Во избежание высыхания во время исследования пленку можно смешать с двумя-тремя каплями 50 % раствора глицерина.

Учитывают все обнаруженные в препарате яйца гельминтов.

Диагностическое значение: описанным методом можно выявить заражение аскаридами, власоглавами, анкилостомидами, тениидами, трематодами, лентецами и другими видами гельминтов.

5.6 Флотационные методы

В настоящее время для диагностики описторхоза (клонорхоза) рекомендуют методы Като и Калантарян, как достаточно эффективные и технически более простые.

5.7 Метод липкой ленты

Метод липкой ленты используется для диагностики энтеробиоза. Кусочек липкой прозрачной полиэтиленовой ленты длиной 4-5 см липким слоем прикладывают через анус к перианальным складкам, сразу же снимают и приклеивают на предметное стекло. Полученные таким образом препараты микроскопируют.

Преимущества этого метода перед соскобом с перианальных складок заключается в быстроте и возможности довольно долгого хранения препаратов.

ГЛАВА VI. КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Количественные методы исследования применяются при определении интенсивности инвазии, оценке эффективности различных антигельминтных препаратов, определении качества дегельминтизации, контроле проводимых массовых лечебно-профилактических мероприятий и др.

Количественное определение яиц гельминтов исследуется двумя методами: методом Столла и методом Красильникова и Волковой (1974).

.1 Метод Столла

Метод стола используется при аскаридозе. Необходимое оборудование: микроскоп, стеклянная колба с отметкой 56 и 60 миллилитров, мерный цилиндр, стеклянные бусы, резиновая пробка для колбы, градуированные пипетки, предметные стекла и 0, 4% раствор едкого натра.

Ход исследования. В колбу с мерным цилиндром наливают децинормальный раствор едкого натра до отметки 56миллилитров и добавляют испражнения до тех пор, пока уровень жидкости не поднимается до отметки 60 миллилитров (получается 4 миллилитра испражнений). Данную смесь взбалтывают со стеклянными бусами на протяжении одной минуты, предварительно закрыв колбу резиновой пробкой (можно перемешать и палочкой). Сразу после взбалтывания набирают градуированной пипеткой 0, 075 миллилитров смеси (в ней содержится 0, 005 миллилитров испражнений), переносят на предметное стекло и подсчитывают количество яиц в препарате под микроскопом. Для того, чтобы определить количество яиц в 1 грамме испражнений, обнаруженное число умножают на 200.

Сравнение числа яиц в пробе, обнаруженное у больного перед лечением и после него, позволяет рассуждать об эффективности дегельминтизации.

Данный метод довольно прост и даёт сравнимые результаты при всех гельминтозах, возбудители которых систематически выделяют яйца в кишечник больного. Однако метод имеет весомый недостаток - относительно низкая чувствительность, особенно при слабой интенсивности инвазии.

.2 Метод Красильникова-Волковой

При исследовании этим методом берут не менее 1 грамма испражнений и смешивают в стеклянной колбочке или большой пробирке с 1% раствором «Лотоса» (можно взять 1, 5% раствора «Экастра») в отношении 1: 10. Взвесь тщательно взбалтывают до образования гомогенной суспензии, сразу после этого набирают градуированной пипеткой 0, 1 миллилитр взвеси (примерно равняется 0, 01 грамм фекалий) и переносят на предметное стекло. Данный препарат покрывают покровном стеклом или целлофановой пластинкой (20 х 30 мм), выдержанной не менее одних суток в 50% водном растворе глицерина.

Подсчитывается число яиц во всем препарате под микроскопом. Чтобы рассчитать количество яиц в одном грамме испражнений полученное число умножают на 100.

Данный метод более эффективен, чем метод Столла. Во-первых, он более чувствителен и позволяет обнаруживать гельминтов при слабой степени инвазии. Во-вторых, он очень удобен при массовых обследованиях, так как растворы детергентов, являются консервантами яиц гельминтов, позволяют проводить исследования и не совсем свежего материала. Однако обязательным условием при этом является сбор фекалий непосредственно в раствор детергента.

Для количественного исследования можно применять любой из описанных унифицированных качественных методов, основанных на принципе всплывания яиц. Но в этом случае для анализа должно быть взято одно и то же количество фекалий, один и тот же объем флотационного раствора. Расчет степени инвазии можно произвести, зная количество яиц в 1 грамме фекалий.

ГЛАВА VII. МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИПРОТОЗОЙНЫХ ИНВАЗИЙ

.1 Нативный мазок

На предметное стекло наносят по 1-2 капли изотоничского раствора в двух местах с небольшим промежутком.

Деревянной палочкой из пробы фекалий выбирают небольшой кусочек и переносят в каплю на предметное стекло, размешивая до образования однородной массы. Далее сверху кладут покровное стекло и рассматривают под микроскопом.

Через хорошо приготовленный препарат должен быть виден печатный текст.

При исследовании кала у больных обнаруживаются просветные формы - цисты. В остром периоде болезни обнаруживаются большие вегетативные формы амеб - эритрофаги (гематофаги), которые быстро погибают во внешней среде. Данные приведены ниже:

Вид инвазииЧисло яиц в 1г фекалийЧисло гельминтов в кишечникеСтепень инвазииАскаридоз1-10001-10Слабая10001-5000011-50Умеренная50001-1900051-200ТяжелаяСвыше 190000Свыше 200ОченьтяжелаяТрихоцефалез1-20001-25Оченьслабая2001-750026-100Слабая7501-37500101-500Умеренная37501-75000501-1000ТяжелаяСвыше 75000Свыше 1000ОченьтяжелаяАнкилостомоз1-25001-25Оченьслабая2501-1000026-100Слабая10000-50000101-500Умеренная50001-100000501-1000ТяжелаяСвыше 100000Свыше 1000ОченьтяжелаяНекатороз1-6001-25Оченьслабая601-210026-100Слабая2101-11000101-500Умеренная11101-22100501-1000ТяжелаяСвыше 22100Свыше 1000Оченьтяжелая

При серологическом исследовании определяют наличие антител к гельминтам (достоверность - около 60 %): при подозрении на эхинококкоз, цистицеркоз, трихинеллез, токсокароз широко используют реакции непрямой гемагглютинации, агглютинации латекса, связывания комплемента, иммунофлюоресценции.

Не во всех случаях методы определения специфических антител обладают достаточной специфичностью и достоверностью. Антигенный состав гельминта зависит не только от вида, но и от стадии; проходя сложный цикл развития от яйца до взрослой особи, гельминты меняют антигенный состав. Кроме того, в иммунодиагностических реакциях используются соматические антитела, а в организме хозяина антитела вырабатываются в основном на экскреты и секреты гельминта. Неспецифическая сенсибилизация организма, общность некоторых антигенов трематод, простейших и человека создают высокий удельный вес ложноположительных реакций в титрах ниже достоверно диагностических.

Метод определения гельминтов с помощью полимеразной цепной реакции является высокоспсцифичным и высокочувствительным, но из-за дороговизны и сложности не может быть скрининговым, когда, например, нужно обследовать группу детей из детского учреждения.

Иммунная система не всегда реагирует (распознает и уничтожает) но наличие гельминтов в организме. Это объясняется тем, что некоторые гельминты имеют прочною и химически устойчивую капсулу, или покрыты веществом, которое не распознается иммунной системой; локализуются в тканях, наиболее защищенных от воспалительных реакций, например в спинном мозге; многие виды из них в пищеварительном тракте выделяют антиэнзимы, что спасает их от гибели; имеют большую продолжительность жизни (годами, а иногда до смерти самого человека); питаются за счет гликолиза чистых углеводов; имеют такие приспособления, как присоски, крючки и др. , что способствует фиксации внутри организма; у многих видов существует половое размножение, при котором происходит обмен генной информацией, что приводит к усилению гетерогенной популяции, уменьшению уязвимости; обладают высоким уровнем плодовитости. Данные методы исследования можно считать эффективными только в том случае, когда гельминты располагаются непосредственно в тканях человеческого организма. В данном случае применяют: кожную и внутрикожную пробу, реакцию кольцепреципитации, непрямую гемагглютинацию и так далее.

В крови инвазированных лиц происходит увеличение титров специфических антител, сначала IgM-, а затем IgG-классов. Если это не реинвазия, то в организме больного с аллергическими проявлениями еще отсутствуют гельминты в репродуктивной стадии развития, и диагностика гельминтоза невозможна. Период созревания гельминта может быть достаточно продолжительным и зависит от многих факторов. !!! На этой стадии диагностика заболевания возможна только по выявлению антител к антигенам гельминта. Использование высокочувствительного метода иммуноферментного анализа с этой целью оказалось весьма эффективным.

Иммунологические методы используют для выявления шистосомоза, альвеококкоза, цистицеркоза, эхинококкоза, аскаридоза и прочих видов гельминтов.

Сопутствующие обследования также могут подтвердить гельминтозы. Гельминтозы нередко проявляются в анализе на дисбактериоз и общем анализе крови (низкий гемоглобин, повышенная СОЭ, эозинофилия).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время нет простого, доступного и надежного метода диагностики гельминтозов. Выбор того или иного метода зависит от вида гельминта, а также стадии заболевания.

В заключении хочется напомнить о том, что диагностика любого

Важное значение на сегодняшний день в связи с сложившейся ситуацией следует уделить профилактике.

Профилактика гельминтозов включает комплекс мероприятий по выявлению больных, их лечение, обеспечение условий жизни, быта и производства, исключающих распространение этих болезней, охрану и оздоровление окружающей среды от возбудителей. Объем и характер проводимых мероприятий по снижению заболеваемости наиболее распространенными среди населения Российской Федерации геогельминтозами определяются уровнем пораженности, климатическими условиями, особенностями быта и хозяйственной деятельности населения и результатами санитарно-гельминтологического мониторинга, так как геогельминтозы - это в первую очередь санитарная проблема. В основе профилактики трихинеллеза, тениаринхоза, тениоза лежит обеспечение безопасности для здоровья человека мясной продукции, а предупреждение описторхоза, дифиллоботриозов, и других гельминтозов, передающихся через рыбу, ракообразных, моллюсков и пресмыкающихся, состоит в обеспечении гарантированной безопасности рыбной и другой соответствующей продукции. Профилактика и борьба с эхинококкозом и альвеококкозом осуществляется с помощью мер, направленных на предупреждение заражения человека, сельскохозяйственных животных, собак; необходимы санитарное просвещение, проведение регулярного медицинского обследования контингентов риска (оленеводов, звероводов, охотников). В профилактике гельминтозов, передающихся контактным путем (энтеробиоз), основное значение имеют меры, направленные на разрыв механизма передачи их возбудителей, при этом следует учитывать, что эти гельминтозы преимущественно поражают детей в организованных коллективах.

Необходимо соблюдать меры личной профилактики - мыть руки перед едой, после посещения туалета, возвращения с улицы домой, после контакта с животными. Ягоды, овощи, фрукты, зелень нужно тщательно промыть проточной водой и ополаскивать кипяченой водой. Нельзя пробовать сырой мясной или рыбный фарш. Рыбу, морепродукты, мясо следует хорошо прожаривать, тушить или варить. Необходимо помнить о своих домашних животных - не вскармливать им сырую рыбу, мясо, внутренние органы животных, проводить периодически их профилактические лечение (дегельминтизацию).

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. М. В. Северин, Д. Н. Понамарев, В. М. Борзунов, Т. Б. Третьякова. Методы диагностики наиболее распространенных протозоозов и гельминтозов Екатеринбург 1996г. -71с.

А. М. Бронштейн, Н. А. Малышев. »Гельминтозы человека» Москва 2010 г. -109с.

Методическое пособие Гельминтозы в практике педиатра Москва 2008г. -30с.

Http: //doctorspb. ru/ медицинский портал для врачей и студентов.

Биология под редакцией академика РАМН, профессора В. Н. Ярыгина: Том 2. Москва издательская группа «ГЭОТАР-Медиа», 2012 - 553с.

Слюсарев А. А. , Жукова С. В. - К. : Вищашк. Головное издательство, 1987-415с.

Http: //www. pasteur-nii. spb. ru/ Гельминтология

12. http: //www. rusnauka. com/17_APSN_2013/Biologia/10_140855. doc. htm

клинико-патогенетические особенности и современное состояние диагностики, лечения Гельминтозов человека

Http: //fersirs. ucoz. ru/news/klassifikacija_gelmintov_klassifikacija_gelmintozov_po_voz/2013-12-19- Классификация гельминтов.

Репетиторство

Нужна помощь по изучению какой-либы темы?

Наши специалисты проконсультируют или окажут репетиторские услуги по интересующей вас тематике.
Отправь заявку с указанием темы прямо сейчас, чтобы узнать о возможности получения консультации.

Для обнаружения фрагментов гельминтов фекалии просматривают невооруженным , затем смешивают с водой и исследуют небольшими порциями в чашке Петри на темном фоне. Все подозрительные частицы помещают на предметное стекло в каплю воды и исследуют под лупой. Можно суточную порцию поместить в цилиндр с добавлением 5-10-кратного количества воды. После размешивания сосуд оставляют до полного осаждения взвешенных частиц. Поверхностный слой жидкости сливают и наливают чистую воду. Отмытый осадок просматривают небольшими порциями в невооруженным глазом или под лупой. Для обнаружения яиц применяют микроскопические методы исследования.

Метод нативного мазка. Небольшое количество кала из разных мест исследуемой порции растирают на предметном стекле в капле 50% раствора глицерина, изотонического раствора хлорида натрия или воды. Смесь накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом.

Метод всплывания по Фюллеборну. Одну часть испражнений размешивают в 20 частях насыщенного раствора хлорида натрия (удельный вес 1,18), добавляемого небольшими порциями. Всплывшие на поверхность крупные частицы немедленно удаляют, а смесь оставляют на 45 мин. В течение этого времени яйца гельминтов, имеющие меньший удельный вес, чем раствор хлорида натрия, всплывают на поверхность. Поверхностную пленку снимают проволочной петлей диаметром около 1 см и переносят на предметное стекло для исследования под микроскопом.

Метод Калантарян. Эффективность метода всплывания повышается при замене хлорида натрия насыщенным раствором азотнокислого натрия. В этом случае смесь выдерживают 10-15 мин.

Поверхностную пленку, образующуюся после отстаивания смеси кала с раствором хлорида натрия или азотнокислого натрия, можно снимать и предметным стеклом. С этой целью баночку, налитую до краев смесью испражнений с раствором соли, накрывают предметным стеклом так, чтобы нижняя его поверхность соприкасалась с жидкостью. После отстаивания стекло снимают и, быстро повернув кверху поверхностью, на которой находится пленка, просматривают под микроскопом.

Соскоб сперианальных складок (для выявления яиц остриц и онкосфер бычьего цепня) делают утром до совершения туалета. Деревянным шпателем, смоченным в воде или в 50% растворе глицерина, производят соскабливание вокруг анального отверстия. Полученный материал переносят на предметное стекло в каплю воды или 50% раствора глицерина и просматривают под микроскопом. Шпатель можно заменить влажным ватным тампоном, которым протирают перианальную область, затем хорошо прополаскивают в воде. Воду центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом.

Метод Берманна (для выявления личинок). Металлическую сетку с нанесенными на нее 5-6 г фекалий укрепляют на стеклянной воронке, вставленной в штатив. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку с зажимом. Воронку наполняют водой, подогретой до t° 50°, так, чтобы нижняя часть сетки с калом соприкасалась с водой. Личинки активно переходят в воду и скапливаются в нижней части резиновой трубки. Через 4 часа жидкость спускают в центрифужные пробирки, центрифугируют и осадок просматривают под микроскопом.

Анализ мокроты, носовой слизи и влагалищных выделений для выявления яиц легочной трематоды парагонимуса, личинок аскарид и анкилостомид, яиц остриц, фрагментов эхинококкового пузыря. Исследуемую порцию слизи (выделений) намазывают на стекло и просматривают на черном и белом фоне макроскопически, а затем под микроскопом. Можно добавить к исследуемому материалу 25% раствор антиформина, тщательно взболтать и выдержать 1-1,5 часа в для растворения слизи. Смесь центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом.

Анализ дуоденального и желудочного сока для выявления яиц печеночных трематод, анкилостомид, личинок Strongyloides. Все три порции дуоденального содержимого, полученные при , центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом. Так же исследуют и .

Исследование тканей. Для выявления личинок трихинелл кусочки биопсированной мышцы тщательно расщепляют на волоконца, сдавливают между компрессорными стеклами (толстые стекла с винтами) и исследуют под микроскопом с затененным светом. Для выявления цистицерков мышцы расслаивают препаровальными иглами, выделенный пузырек очищают от окружающей ткани, сдавливают между двумя предметными стеклами и исследуют под лупой.

Анализ крови (для выявления личинок филярий). Исследуют висячую каплю на покровном стекле, окантованном вазелином. Можно 0,3 мл крови смешать с 10-кратным количеством 3% раствора . Смесь центрифугируют и осадок исследуют под микроскопом. Для обогащения препаратов к 1 мл венозной крови прибавляют 3 мл 2% раствора формалина или 5-кратное количество жидкости, состоящей из 95 мл 5% раствора формалина, 5 мл уксусной кислоты и 2 мл концентрированного спиртового раствора гематоксилина. Смесь центрифугируют, осадок промывают дистиллированной водой путем и исследуют под микроскопом. Для дифференцирования разных видов филярий исследуют мазки, окрашенные по методу Гимзы - Романовского.

Методы иммунологической диагностики. Применяют (агглютинации, связывания комплемента) и аллергические диагностические пробы (см.) с из соответствующего вида гельминта.

Гельминтологические методы исследования. Рис. Яйца гельминтов. 1-10 - яйца круглых червей (нематод): 1 - 3 - аскариды (1 - оплодотворенное яйцо, 2 - оплодотворенное яйцо без белковой оболочки, 3 - неоплодотворенное яйцо); 4 - аскариды кошачьей; 5 -аскариды плотоядных; 5 -острицы; 7 - власоглава; 8 - томинкса; 9 - анкилостомид; 10 - трихо-стронгилид. 11- 15 - яйца ленточных червей (цестод): 11 - цепня бычьего; 12 - цепня карликового; 13 - цепня крысиного; 14 - цепня тыквовидного; 15 -лентеца широкого. 16 - 24 - яйца сосальщиков (трематод): 16 - трематоды (шистосомы) японской; 17 - трематоды (шистосомы) моче - половой; 18 - трематоды (шистосомы) Мансона; 19 - трематоды (парогонимус) легочной; 20 - трематоды (описторхис) сибирской (кошачьей); 21 - трематоды (клонорхис) китайской; 22 - трематоды (метагонимуса) кишечной; 23 - трематоды (фасциолы) печеночной; 24 - трематоды (дикроцелиум) ланцетовидной.

Эффективным и удобным методом гельминтологического исследования является изучение толстого мазка по Като , сущность которого состоит в обнаружении яиц гельминтов в толстом мазке фекалий, просветленных глицерином и подкрашенных малахитовой зеленью. Состав смеси Като - 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина, 500 мл 6% раствора фенола. Раствор стабилен, может храниться при комнатной температуре. Для приготовления препаратов кусочки фекалий величиной с горошину наносят на предметное стекло, покрывают пленкой гидрофильного целлофана, выдержанного в смеси Като в течение 24 ч, и придавливают его к стеклу для равномерного распределения материала. Просветленные в течение 40-60 мин мазки микроскопируют. Подсчитывают обнаруженные яйца гельминтов и по морфологическим признакам определяют их видовую принадлежность. Метод позволяет выявить яйца аскарид, власоглава, цестод, трематод, в меньшей степени - анкилостомид и карликового цепня.

Широко применяются также методы обогащения . Принцип флотационных методов состоит в суспендировании фекалий в солевом растворе, имеющем большую относительную плотность по сравнению с яйцами гельминтов, вследствие чего они всплывают на поверхность. Под микроскопом исследуется содержимое поверхностной пленки. В качестве обогатительных смесей используют растворы: поваренную соль - 400 г в 1 л воды (относительная плотность по Фюллеборну -1,18); азотнокислый натрий - 1 кг в 1 л воды (относительная плотность по "Калантарян-1,38); азотнокислый натрий - 900 г и азотнокислый калий - 400 г в 1 л воды (относительная плотность по Брудастову и Красноносу-1,48). Приготовленные растворы кипятят и охлаждают.
Для исследования вносят 5-10 г фекалий в стеклянный или фаянсовый стакан, добавляют в него 100-200 мл солевого раствора и тщательно размешивают. Затем удаляют всплывшие крупные частицы деревянным шпателем или совочком из бумаги либо картона и тотчас же прикладывают к поверхностной пленке широкое предметное стекло так, чтобы солевой раствор и предметное стекло полностью соприкасались. После 30-40-минутного отстаивания смеси предметное стекло снимают, кладут под микроскоп пленкой кверху и тщательно просматривают всю поверхность. Во избежание высыхания можно добавить 2-3 капли 50% раствора глицерина. Поверхностную пленку можно снимать также проволочной петлей. Эффективность флотационных методов повышается по мере увеличения относительной плотности солевых растворов. С помощью этих методов можно выявлять яйца нематод, цестод и трематод.

Для обнаружения яиц в фекалиях применяют метод седиментации по Красильникову . Фекалии смешивают с 1 % раствором детергента (стиральный порошок «Лотос» и др.) в соотношении 1:10 до образования суспензии. Под влиянием детергента растворяются различные компоненты фекалий (белки, жиры, тканевые элементы). Через 30 мин содержимое пробирки встряхивают в течение 1-2 мин, после чего центрифугируют 5 мин. Из осадка готовят препараты и просматривают под микроскопом.
В полевых условиях, а также при массовых обследованиях населения на пораженность гельминтами удобно применять метод толстого мазка по Като. В стационарных условиях при обследовании больных предпочтительнее использовать наиболее эффективные флотационные методы. При использовании этих методов в ходе микроскопии целесообразно подсчитывать обнаруженные в препарате яйца. При соблюдении стандартности навески или объема, взятых для исследования фекалий (например, 1 чайная или столовая ложка), и постоянного единого объема солевых растворов можно ориентировочно судить об интенсивности инвазий. Этот количественный учет может быть полезным при обосновании назначенного лечения и оценке эффективности проведенной дегельминтизации. Кроме того, для установления интенсивности инфекции могут быть использованы и другие более точные количественные методы, в частности метод Столла.

Для диагностики тениаринхоза и энтеробиоза применяют метод исследования перианально-ректальных соскобов. Деревянным шпателем, смоченным в 50% растворе глицерина, делают соскоб с перианальных складок утром до дефекации в окружности заднего прохода и нижних отделов прямой кишки. Полученный материал, очищенный со шпателя краем покровного стекла, помещают на предметное стекло в каплю 50% раствора глицерина, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Можно исследовать также полоску целлюлозной ленты, которую вначале прижимают клейкой стороной к пернанальным складкам, затем помещают на предметное стекло и микроскопируют.

Обнаружение личинок нематод в фекалиях по методу Бермана . Метод основан на термотропном свойстве личинок. Для исследования берут 1 столовую ложку фекалий, помещают их в металлическую сетку или сетку из нескольких слоев марли на проволочном каркасе. Сетку устанавливают в воронку, укрепленную в штативе. К воронке присоединяется резиновая трубка с зажимом. Приподняв сетку, воронку заполняют водой (температура +40°...+50°С) так, чтобы нижняя часть сетки была погружена в воду. Личинки из фекалий активно мигрируют в теплую воду и, оседая, скапливаются в нижней части воронки. Через 2-4 ч зажим открывают, воду спускают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 2-3 мин. Затем сливают надосадочную жидкость, осадок переносят на предметное стекло и просматривают под микроскопом, где отыскивают подвижные личинки возбудителя стронгилоидоза.

Метод Харада и Мори позволяет дифференцировать личинки анкилостом и некаторов. Личинки анкилостомид культивируют на фильтровальной бумаге. С этой целью 0,5 г свежих фекалий, взятых у больного не позже чем через 1 ч после дефекации, наносят на полоски фильтровальной бумаги, размером 12X1,5 см, оставляя оба конца полоски чистыми. Один конец полоски погружают в пробирку, четвертая часть которой заполнена водой, а другой - зажимают пробкой. Пробирки ставят в термостат при температуре +26... + 28°С. Развившиеся из яиц личинки опускаются по фильтровальной бумаге и оседают на дно пробирки. Спустя 5-6 дней полоску бумаги удаляют, а оставшуюся в пробирке жидкость исследуют под лупой либо центрифугируют. Образовавшийся при центрифугировании осадок исследуют под световым микроскопом. При использовании вместо пробирок четырехгранных стеклянных банок (размером 15ХЮХ7 см), к стенкам которых прикрепляют по 4 бумажные полоски, эффективность анализов повышается (Г. М. Ма- руашвили с соавт., 1966).

Методы исследования на шистосомозы . Исследование фекалий - порцию фекалий смешивают с 250 мл воды, процеживают через 3 слоя марли в конический сосуд, который доверху наполняют водой. Через 30 мин слой жидкости сливают, к осадку приливают свежую порцию воды. Осадок промывают до получения прозрачной надосадочной жидкости и микроскопируют.

Метод лярвоскопии - в колбу Эрленмейера с напаянной сбоку стеклянной трубочкой, направленной вверх, помещают 20-25 г фекалий и промывают водопроводной водой. Затем колбу накрывают темной бумагой, оставив на свету напаянную стеклянную трубочку при температуре +25...+30°С. Вылупившиеся мирацидии концентрируются у мениска в боковой трубочке, где их можно видеть с помощью лупы или невооруженным глазом. Исследование мочи -100 мл мочи, собранной в период между 10 ч утра и 14 ч дня, или суточную порцию отстаивают, а затем центрифугируют при 1500 об/мин. Полученный осадок наносят* на предметное стекло и микроскопируют. ВОЗ рекомендует метод фильтрования всей порции мочи. После фильтрования фильтры обрабатывают формалином или подогревают (чтобы убить яйца), а затем увлажняют водным раствором нингидрина. В подсушенных препаратах зародыши яиц приобретают фиолетовую окраску.

Применение иммунологических методов исследования для диагностики шистосомозов связано с трудностями, так как взрослые шистосомы и их яйца содержат большое количество антигенов, вызывающих иммунные реакции, которые не являются видоспецифическими (Д. Бредли, 1979).

В нашей стране для постановки иммунологических реакций при гельминтозах выпускается целый ряд стандартных диагностикумов. Практическое применение имеют аллергическая кожная проба на эхинококкоз и альвеококкоз, РЛА с эхинококковым антигеном, РСК на холоде, реакция преципитации на холоде в различных модификациях (кольцевая преципитация, преципитация в пробирках или капиллярах, которые ставятся с трихинеллезным, цистицеркозным и мигроаскаридозным антигенами). Стандартные диагностикумы для постановки вышеназванных серологических реакций изготавливаются предприятиями по производству бактерийных препаратов. К выпускаемым диагностикумам предприятие-изготовитель прилагает подробные инструкции о правилах хранения, сроках годности препарата и наставления по применению соответствующих антигенов с техникой постановки реакции.

В последние годы перечень серологических реакций, применяемых для диагностики гельминтозов, значительно расширился. В этих целях используются следующие реакции: РИГА, непрямой иммунофлюоресценции (РИФ), иммунодиффузии в геле (РИД), встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ), РЭМА. Эти реакции могут использоваться при аскаридозе, токсокарозе, трихинеллёзе, анкилостомидозах, филяриатозах, эхинококкозе и альвеококкозе, опистор- хозе, шистосомозе, парагонимозе. Однако для этих реакции в нашей стране,не выпускаются стандартные диагностикумы и не регламентирована техника их постановки. Отдельные лаборатории, в основном научные, готовят самостоятельно специфические антигены и применяют их в различных модификациях. Описание этих методов широко представлено в литературе и не является строго унифицированным. Интерпретация данных иммунологического анализа должна основываться на изучении динамики иммунного ответа с учетом уровня специфичности и чувствительности каждой применяемой серологической реакции. Поэтому при постановке диагноза, а также при сероэпидемиологических обследованиях населения целесообразно пользоваться несколькими наиболее чувствительными реакциями. С этих позиций хорошо зарекомендовали себя реакции ВИЭФ и РЭМА, которые отличаются высокой чувствительностью и достаточно высокой специфичностью (П. Амбруаз-Тома, 1978; И. Е. Баллад, 1979; Г. М. Негряну, 1980; А. М. Пономарева, 1981; А. Я. Лысенко, 1978, и др.). Эффективность РЭМА проверена при амебиазе, лейшманиозе, трипаносомозе и токсоплазмозе (Г. А. Ермолин, 1980).

← Вернуться