ГЕМОГЛОБИН
Гемоглобин (Нв) – сложный белок (хромопротеид) - окрашивает эритроциты в красный цвет, состоит из белка глобина и четырех молекул гема. Гем является активной частьюи содержит двухвалентное железо, одна молекула гема способна присоединять и отдавать одну молекулу кислорода. Глобин является белковым носителем гема. Гемоглобин в легких присоединяет к себе кислород, образуя непрочное, легко диссоциируемое соединение – оксигемоглобин (НвО 2). Кровь, насыщенная оксигемоглобином (артериальная), поступает в ткани организма, где оксигемоглобин распадается на восстановленный гемоглобин и кислород. Восстановленный гемоглобин (дезоксигемоглобин) втканях соединяется с углекислым газом, образуя также непрочное соединение карбгемоглобин (НвСО 2). Кровь, насыщенная восстановленным гемоглобином и карбгемоглобином (венозная) поступает в малый круг кровообращения. В крови плода находится фетальный гемоглобин (НвF), который может значительно больше насыщаться кислородом, чем гемоглобин матери. Считается, что фетальный гемоглобин синтезируется в печени, а гемоглобин взрослых животных – в красном костном мозге. Гемоглобин легко вступает в соединение с угарным газом (окись углерода), образуя карбоксигемоглобин (НвСО), который утрачивает способность к переносу кислорода. Уже при содержании во вдыхаемом воздухе только 0,04% окиси углерода наступает тяжелое отравление, а при концентрации 0,1% – гибель животного. При слабом отравлении окись углерода постепенно отщепляется, и гемоглобин восстанавливает свою способность к присоединению и переносу кислорода. При действии на гемоглобин сильных окислителей (бертолетова соль, перекись водорода, анилин и др.) образуется достаточно прочное соединение гемоглобина с кислородом - метгемоглобин (МtНв), в котором двухвалентное железо переходит в трехвалентную форму. Это соединение прочно удерживает кислород и не может отщеплять его тканям. При образовании большого количества метгемоглобина наступает гибель животного от удушья. В животноводческой практике метгемоглобин образуется при скармливании животных кормов, содержащих большое количество нитратов от внесения в почву больших доз азотистых удобрений. Качественное определение гемоглобина и его производных можно провести при помощи спектрального анализа, а количественное – различными калориметрическими методами (табл. 7.).
Таблица 7.Соединение гемоглобина в крови животных г/л крови
|
Вид животных |
Вид животных | ||
|
Лошади Крупный рогатый скот Свиньи Овцы |
80-130 90-120 90-110 70-110 |
Кролики Пушные звери Птица Рыбы |
100-120 120-170 80-130 60-120 |
Низкое содержание гемоглобина может наблюдаться при несбалансированном кормлении животных, нарушении синтеза гемоглобина, что приводит к значительным нарушениям многих функций организма.
Для установления насыщенности эритроцитов гемоглобином определяют цветовой показатель или индекс g .
В норме этот показатель равен 1 ± 0,15%
Миоглобин – это сложный белок, содержащийся в скелетных и сердечной мышцах. Миоглобин может связывать 14-15% общего количества кислорода. Кислород миоглобина используется мышцамипри их сокращении, когда приток крови в их капиллярах уменьшается. При расслаблении мышц миоглобин снова присоединяет к себе кислород. В значительно больших количествах миоглобин содержится в мышцах морских млекопитающих, что дает им возможность длительное время находиться под водой.
При разрушении эритроцитов гемоглобин распадается на гем и глобин, часть железа гема окисляется с образованием специфического соединения-гемосидерина, используемого для синтеза нового гемоглобина. Остальная часть гема превращается в желтые пигменты – билирубин и биливердин, которые в дальнейшем в виде уробилина и урохрома выделяются с мочой или в виде стеркобилина - с каловыми массами.
Гемоглобин (Нb) составляет около 95 % белка эритроцитов. Один эритроцит содержит 280 млн молекул гемоглобина. Hb относится к сложным белкам - хромопротеидам. В его состав входит железосодержащая простетическая группа — гем (4 %) и простой белок типа альбумина — глобин (96 %).
Молекула Hb - тетрамер, состоящий из 4 субъединиц - полипептидных цепей глобина (2 цепи α и 2 цепей β, γ, δ, ε, ζ в разных комбинациях), каждая из которых ковалентно связана с одной молекулой гема. Гем (небелковая пигментная группа) построен из 4 молекул пиррола, образующих порфириновое кольцо, в центре которого находится атом железа (Fe2+). Основная функция Hb - перенос O2.
Синтез Hb происходит на ранних стадиях развития эритробластов. Синтез глобина и гема протекает в эритроидных клетках независимо друг от друга. У всех видов животных гем одинаков; различия свойств Нb обусловливаются особенностями строения белковой части его молекулы, т. е. глобина.
У взрослого человека в норме в крови содержится три типа гемоглобина: НbА (96-98 %); НbА2 (2-3 %) и НbF (1-2 %). Глобин человека состоит из 574 остатков различных аминокислот, образующих четыре попарно одинаковые полипептидные цепи: две α-цепи — по 141 аминокислотному остатку и две β-цепи — по 146 остатков аминокислот. Общая формула молекулы гемоглобина человека — НbА-α2β2.
В состав НbА2 входят две α и две δ-цепи (α2δ2), а НbF — две α- и две γ-цепи (α2γ2). Синтез цепей гемоглобина обусловливается структурными генами, ответственными за каждую цепь, и генами-регуляторами, осуществляющими переключение синтеза одной цепи на синтез другой.
На ранних стадиях эмбриогенеза (с 19-го дня по 6-ю неделю) синтезируются в основном эмбриональные гемоглобины - HbP (Гоуэр1 (ξ2ε2), Гоуэр2 (α2ε2) и Портлад (ξ2γ2)).
В течение указанного времени кроветворение постепенно переключается с желточного мешка на печень. При этом выключается синтез ξ- и ε-цепей и включается синтез γ-, β-, δ-цепей. К 4-му месяцу эритроциты печеночного происхождения доминируют в циркулирующей крови и содержат фетальный гемоглобин (HbF).
Гемоглобины различаются по биохимическим, физико-химическим, иммунобиологическим свойствам. Так, НbF по сравнению с НbА более устойчив к щелочам, менее — к температурным влияниям, обладает более высоким сродством к кислороду и способен быстрее отдавать углекислоту. К моменту рождения имеются оба типа Нb (НbF и НbА). Затем «фетальный» Нb постепенно сменяется «взрослым». Иногда у взрослых может обнаруживаться минимальное (до 2 %) количество НbF, что не имеет патологического значения.
При мутациях в структурных генах, контролирующих синтез Нb, когда заменяются аминокислоты, в полипептидных цепях глобина образуются аномальные гемоглобины.
Известно более 400 аномальных Нb, для которых характерны нарушения первичной структуры той или иной полипептидной цепи НbА (гемоглобинопатии, или гемоглобинозы). Основными видами таких Hb являются:
- серповидно-клеточный гемоглобин (НbS) — возникает при замене глютаминовой кислоты на валин в β-цепи; в этом случае развивается серповидно-клеточная анемия;
- метгемоглобины (около 5 разновидностей) образуются, если гистидин заменяется на тирозин; в этом случае окисление Нb в метгемоглобин, постоянно происходящее в норме, становится необратимым.
Количество гемоглобина в крови является важным клиническим показателем дыхательной функции крови. Оно измеряется в граммах на литр крови:
Лошади - в среднем 80-140 г/л,
КРС - 90-120 г/л,
Свиньи - 90-110 г/л,
Овцы - 70-110 г/л,
Птицы - 80-130 г/л,
Пушные звери - 120-170 г/л,
Человек - 120-170 г/л.
Формы гемоглобина:
Оксигемоглобин - соединение с O2.
Карбогемоглобин (HbCO2) - соединение с CO2.
Метгемоглобин (MetHb) - Hb, содержащий Fe гема в трёхвалентной форме (Fe3+); не переносит О2. Образуется в результате воздействия на эритроциты сильных окислителей (нитраты, нитриты, парацетамол, никотин, сульфаниламиды, лидокаин).
Карбоксигемоглобин - соединение с CO.
Гликозилированный Hb - Hb, модифицированный ковалентным присоединением к нему глюкозы (норма 5,8-6,2%). К одним из первых признаков сахарного диабета относят увеличение в 2-3 раза количества гликозилированного Hb.
Солянокислый гематин - результат взаимодействия ферментов и соляной кислоты желудочного сока с Hb. Окрашивает дно эрозий и язв в коричневый цвет и придаёт рвотным массам при желудочном кровотечении вид «кофейной гущи».
Кристаллы гемоглобина у животных имеют видовые особенности, что используется для идентификации крови или её следов в судебной ветеринарии и медицине (солянокислый гематин в пробе Тейхмана).
Гемоглобин высоко токсичен при попадании значительного его количества из эритроцитов в плазму крови (что происходит при массивном внутрисосудистом гемолизе, геморрагическом шоке, гемолитических анемиях, переливании несовместимой крови и других патологических состояниях). Токсичность гемоглобина, находящегося вне эритроцитов, в свободном состоянии в плазме крови, проявляется тканевой гипоксией — ухудшением кислородного снабжения тканей, перегрузкой организма продуктами разрушения гемоглобина — железом, билирубином, порфиринами с развитием желтухи, закупоркой почечных канальцев крупными молекулами гемоглобина с развитием некроза почечных канальцев и острой почечной недостаточности.
Ввиду высокой токсичности свободного гемоглобина в организме существуют специальные системы для его связывания и обезвреживания. Например, особый плазменный белок гаптоглобин, специфически связывающий свободный глобин и глобин в составе гемоглобина. Комплекс гаптоглобина и глобина (или гемоглобина) затем захватывается селезёнкой и макрофагами тканевой ретикуло-эндотелиальной системы и обезвреживается.
68. Колориметрический способ определения количества гемоглобина в крови. Количество гемоглобина в крови в норме у разных видов животных.
Объект исследования – кровь животных.
Материалы и оборудование – пробирки, гемометр Сали, пипетка от гемометра Сали, 0,1 н. раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, вата, бинт.
Ход работы. Колориметрическое определение гемоглобина производится гемометром Сали, в комплект которого входят микропипетка и стеклянная палочка. Прибор состоит из пластмассового корпуса с тремя гнездами для пробирок. В задней стенке корпуса вмонтировано матовое белого цвета стекло, рассеивающее свет. В боковые гнезда вставлены одинакового размера запаянные пробирки со стандартно окрашенным раствором, а в среднее гнездо градуированная пробирка для исследуемой крови. На всех пробирках имеются две круговые контрольные метки, нижняя из них соответствует ѐмкости 0,2 мл, верхняя - 2 мл. Для определения гемоглобина в градуированную пробирку гемометра наливают 0,1 н. раствора соляной кислоты до нижней метки. В капиллярную пипетку, прилагаемую к прибору, насасывают 20 мм3 (0,02 мл) крови. Конец пипетки вытирают ватой, опускают ее на дно пробирки в раствор соляной кислоты и выдувают кровь. Не вынимая пипетки из пробирки, несколько раз промывают ее верхней частью раствора. После этого содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют на 5 минут в штативе для полного гемолиза эритроцитов. Гемоглобин, вступая в реакцию с соляной кислотой, образует солянокислый гематин, который имеет коричневую окраску. Через 5 мин в пробирку по каплям, при постоянном помешивании стеклянной палочкой, добавляют дистиллированную воду до тех пор, пока цвет жидкости не совпадет с цветом стандартного раствора в пробирках, расположенных по бокам гемометра. Затем пробирку с полученным рабочим раствором достают из гемометра и смотрят на выгравированную на ней шкалу. По нижнему мениску жидкости определяют содержание гемоглобина в г%, если полученную цифру умножить на 10, то будет выражение количества гемоглобина в г.
Определение по методу Сали .
Колориметрическое определение гемоглобина производится гемометром Сали. Этот метод основан на образовании солянокислого-гематина из деци нормального раствора соляной кислоты и гемоглобина, который имеет коричневую окраску и доводится дистиллированной водой до цвета стандартных растворов. Гемометр состоит из штатива с тремя гнездами (рис).
Рис. Гемометр Сали.
Задняя стенка штатива представляет собой пластинку из матового стекла. В боковые гнезда вставлены одинаковые запаянные пробирки - цветные стандарты. Среднее гнездо с градуированной пробиркой для исследуемой крови. На пробирке нанесена шкала, показывающая количество гемоглобина в грамм % (т. е. сколько грамм гемоглобина содержится в 100 мл. крови). В градуированную пробирку наливают 0.1% раствор HCl до нижней круговой метки (0,2 мл). В капиллярную пипетку набирают 0,02 мл крови. Кровь, приставшую к кончику капилляра, удаляют ваткой. Опускают капилляр на дно градуированной пробирки и осторожно выдувают из него кровь так, чтобы верхний слой раствора остался прозрачным. Не вынимая капилляраиз верхнего слоя раствора, 2-3 раза промывают его. После этого содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют на 5 минут в штативе для полного гемолиза эритроцитов. Гемоглобин, вступая в реакцию с соляной кислотой, образует солянокислый гематин, который имеет коричневую окраску. Затем к раствору по каплям прибавляют дистиллированную воду и перемешивают стеклянной палочкой до получения одинакового окрашивания со стандартом. Деление на шкале, до которого поднялась жидкость, позывает количество гемоглобина. Грамм-процент переводят умножения полученный результат на 10, что соответствует содержанию гемоглобина в 1 л крови (г/л).
Состав крови у здоровых сельскохозяйственных животных
69. Определение времени свертывания крови. Противосвертывающая система крови в организме Свертывание крови – защитная биологическая реакция, предохраняющая организм животного и человека от потери крови. Свертывание крови является сложным процессом, в котором участвует свыше 15 факторов (рис.). Свертывание – переход крови из жидкого состояния в желеобразное. Оно происходит при повреждении сосуда и сопровождается образованием тромба. При травме происходит спазм сосуда и выделение серотонина – это приводит к гемостазу. Кровь может свернуться и в неповрежденном кровеносном сосуде, что вызывает нарушение ее циркуляции и кровоснабжения отдельных тканей и органов, поэтому в организме имеется противосвертываюшая система крови, препятствующая свертыванию ее в кровеносных сосудах.
Рис. Классическая схема свертывания крови Шмидта - Моравица.
Нанести по одной капле крови, вытекающей из надрезанного уха животного, на три предметных стекла. Одно стекло поместить в термостат при +40 о С, другое стекло положить на стол (при комнатной температуре), третье - на снег. Через каждую минуту наклонять стекла с кровью и повторять до тех пор, пока кровь не свернется. Определить время свертывания крови у различных животных. К противосвертывающей системе относят: Антитромбопластины, антитромбины, гепарин, различные соли кислот. Система свертывания находиться под постоянным контролем нейрогуморальной регуляции(при страхе, боли, теипиратуре свертывание крови усиливается. Адреналин и норадреналин освобождают тромбопластин из стенок сосудов).
ГЕМОГЛОБИН
Гемоглобин (Hb) - основной компонент эритроцитов. Основные функции - перенос кислорода от лёгких к тканям, выведение углекислого газа из организма и регуляция кислотно-основного состояния.В норме концентрация гемоглобина у собак 110-190 г\л, у кошек 90-160 г\л.
Причины повышения концентрации гемоглобина:
1. Миелопролиферативные заболевания (эритремии);
2. Первичные и вторичные эритроцитозы;
3. Обезвоживание;
Причины понижения концентрации гемоглобина:
1. Железодефицитная анемия (снижение относительно умеренное - до 85 г\л, реже - более выраженное - до 60-80 г\л);
2. Анемия из-за острой кровопотери (значительное снижение - до 50-80 г\л);
3. Гипопластическая анемия (значительное снижение - до 50-80 г\л);
4. Гемолитическая анемия после гемолитического криза (значительное снижение - до 50-80 г\л);
5. В12 - дефицитная анемия (значительное снижение - до 50-80 г\л);
6. Анемия, связанная с неоплазиями и\или лейкозами;
7. Гипергидратация (гидремическая плетора).
Причины ложного повышения концентрации гемоглобина:
1. Гипертриглицеридемия;
2. Высокий лейкоцитоз;
3. Прогрессирующие заболевания печени;
4. Серповидно-клеточная анемия (появление гемоглобина S);
5. Миеломная болезнь (при множественной миеломе (плазмоцитоме) с появлением большого количества легко преципитирующих глобулинов).
ГЕМАТОКРИТ
Гематокрит (Ht) - объёмная фракция эритроцитов в цельной крови (соотношение объёмов эритроцитов и плазмы), которая зависит от количества и объёма эритроцитов.Нормальный гематокрит у собак 37-55%, у кошек 30-51%. Стандартный интервал гематокрита выше у борзых собак (49-65%). Кроме того, несколько повышенный гематокрит иногда встречается у отдельных экземпляров собак таких пород как пудель, немецкая овчарка, боксёр, бигль, такса, чихуа-хуа.
Причины снижения гематокрита:
1. Анемии различного генеза (может снижаться до 25-15%);
2. Увеличение объёма циркулирующей крови (беременность, особенно 2 половина, гиперпротеинемия);
3. Гепергидратация.
Причины повышения гематокрита:
1. Эритроцитозы первичные (эритремия) (повышается до 55-65%);
2. Эритроцитозы, вызванные гипоксией различного происхождения (вторичный, повышается до 50-55%);
3. Эритроцитозы при новообразованиях почек, сопровождающиеся усиленным образования эриропоэтина (вторичный, повышается до 50-55%);
4. Эритроцитозы, связанные с поликистозом и гидронефрозом почек (вторичный, повышается до 50-55%);
5. Снижение объёма циркулирующей плазмы (ожоговая болезнь, перитонит, многократная рвота, диарея мальадсорбции и др.);
6. Дегидратация.
Колебания величины гематокрита в норме.
Способность селезёнки сокращаться и расширяться может обусловить значительные изменения гематокрита, особенно у собак.
Причины увеличения гематокрита на 30% у кошек и 40% у собак, вследствие сокращения селезёнки:
1. Физическая нагрузка непосредственно перед взятием крови;
2. Возбуждение перед взятием крови.
Причины падения гематокрита ниже стандартного интервала, вследствие расширения селезёнки:
1. Анестезия, особенно при применении барбитуратов.
Наиболее полную информацию даёт одновременная оценка гематокрита и концентрации общего белка в плазме.
Интерпретация данных определения величины гематокрита и концентрации общего белка в плазме:
Нормальный гематокрит
1. Потеря белка через желудочно-кишечный тракт;
2. Притеинурия;
3. Тяжёлое заболевание печени;
4. Васкулит.
б) Нормальная концентрация общего белка в плазме - нормальное состояние.
1. Повышение синтеза белка;
2. Анемия, маскируемая дегидратацией.
Высокий гематокрит
а) Низкая концентрация общего белка в плазме - сочетание «сокращения» селезёнки с потерей белка.
1. «Сокращение» селезёнки;
2. Первичный или вторичный эритроцитоз;
3. Гипопротеинемия, маскируемая дегидратацией.
в) Высокая концентрация общего белка в плазме - дегидратация.
Низкий гематокрит
а) Низкая концентрация общего белка в плазме:
1. Значительная в данный момент или случившаяся недавно кровепотеря;
2. Чрезмерная гидратация.
б) Нормальная концентрация общего белка в плазме:
1. Повышенное разрушение эритроцитов;
2. Снижение продукции эритроцитов;
3. Хроническая кровопотеря.
в) Высокая концентрация общего белка в плазме:
1. Анемия при воспалительных заболеваниях;
2. Множественная миелома;
3. Лимфопролиферативные заболевания.
СРЕДНИЙ ОБЪЁМ ЭРИТРОЦИТОВ
(корпускулярный объём)MCV (mean corpuscular volum) - средний корпускулярный объём - средняя величина объёма эритроцитов, измеряемая в фемтолитрах (fl) или кубических микрометрах.
MCV в норме у кошек 39-55 fl, у собак 60-77 fl.
Расчет MCV = (Ht (%) : количество эритроцитов (1012/л))х10
Средний объём эритроцитов нельзя определить при наличии в исследуемой крови большого числа аномальных эритроцитов (например, серповидных клеток).
Значения MCV в пределах нормы характеризуют эритроцит как нормоцит, меньше нормального интервала - как микроцит, больше нормального интервала - как макроцит.
Макроцитоз (высокие величины MCV) - причины:
1. Гипотонический характер нарушений водно-электролитного баланса;
2. Регенераторные анемии;
3. Нерегенераторные анемии, обусловленные нарушением иммунной системой и/или миелофиброзом (у некоторых собак);
4. Миелопролиферативные расстройства;
5. Регенераторная анемия у кошек - носителей вируса лейкоза кошек;
6. Идиопатический макроцитоз (без анемии или ретикулоцитоза) у пуделей;
7. Наследственный стоматоцитоз (собаки, при нормальном или слегка повышенном числе ретикулоцитов);
8. Гипертиреоз у кошек (незначительно повышенный при нормальном или повышенно гематокрите);
9. Новорождённые животные.
Ложный макроцитоз - причины:
1. Артефакт вследствие агглютинации эритроцитов (при опосредованных иммунной системой расстройствах);
2. Персистирующая гипернатриемия (при разведение крови жидкостью перед подсчётом количества эритроцитов в электрическом счётчике);
3. Длительное хранение образцов крови.
Микроцитоз (низкие величины MCV) - причины:
1. Гипертонический характер нарушения водно-электролитного баланса;
2. Железодефицитные анемии вследствие хронических кровотечений у взрослых животных (примерно через месяц после их начала вследствие истощения запаса железа в организме);
3. Железодефицитные алиментарные анемии у подсосных животных;
4. Первичный эритроцитоз (собаки);
5. Длительная терапия рекомбинантным эритропоэтином (собаки);
6. Нарушения синтеза гема - длительный дефицит меди, пиридоксина, отравление свинцом, лекарственные вещества (хлорамфеникол);
7. Анемия при воспалительных заболеваниях (MCV снижен немного или в нижних пределах нормы);
8. Портосистемный анастомоз (собаки, при нормальном или слегка сниженном гематокрите)
9. Портосистемный анастомоз и печёночный липидоз у кошек (слабое снижение MVC);
10. Может быть при миелопролиферативных расстройствах;
11. Нарушение эритропоэза у английских спрингер-спаниелей (в сочетание с полимиопатией и болезнью сердца);
12. Персистирующий эллиптоцитоз (у помесных собак в результате отсутствия в мембране эритроцитов одного из белков);
13. Идиопатический микроцитоз у некоторых пород японских догов (акита и шиба) - не сопровождается анемией.
Ложный микроцитоз - причины (только при определение в электронном счётчике):
1. Тяжёлая анемия или выраженный тромбоцитоз (если в расчет с MCV захватываются тромбоциты при подсчёте с помощью электронного счётчика);
2. Персистирующая гипонатриемия у собак (из-за сморщивания эритроцитов при разведении крови in vitro для подсчёта эритроцитов в электронном счётчике).
СРЕДНЯЯ КОНЦЕНТРАЦИЯ ГЕМОГЛОБИНА В ЭРИТРОЦИТАХ
Средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах (МСНС)
- показатель насыщенности эритроцитов гемоглобином.
В гематологических анализаторах величина подсчитывается автоматически или рассчитывается по формуле: МСНС = (Hb (g\dl)\Ht (%))х100
В норме средняя концентрация гемоглобина в эритроцитах у собак 32,0-36,0 g\dl, у кошек 30,0-36,0 g\dl.
Повышение МСНС (бывает крайне редко) - причины:
1. Гиперхромные анемии (сфероцитоз, овалоцитоз);
2. Гиперосмолярные нарушения водно-электролитного обмена.
Ложное повышение МСНС (артефакт) - причины:
1. Гемолиз эритроцитов in vivo и in vitro;
2. Липемия;
3. Присутствие телец Хейнца в эритроцитах;
4. Агглютинация эритроцитов в присутствие холодовых агглютининов (при подсчёте в электрическом счётчике).
Понижение МСНС - причины:
1. Регенераторные анемии (если в крови много стрессовых ретикулоцитов);
2. Хроническая железодефицитная анемия;
3. Наследственный стоматоцитоз (собаки);
4. Гипоосмолярные нарушения водно-электролитного обмена.
Ложное понижение МСНС
- у собак и кошек с гипернатриемией (так как клетки набухают при разведении крови перед подсчётом в электронном счётчике).
СРЕДНЕЕ СОДЕРЖАНИЕ ГЕМОГЛОБИНА В ЭРИТРОЦИТЕ
Расчёт среднего содержания гемоглобина в эритроците (МСН):
МСН = Hb (г/л)/кол-во эритроцитов (х1012/л)
В норме у собак 19-24,5 пг, у кошек 13-17 пг.
Показатель не имеет самостоятельного значения, так как напрямую зависит от среднего объёма эритроцита и средней концентрацией гемоглобина в эритроците. Обычно от напрямую коррелирует со значением среднего объёма эритроцитов, за исключением случаев, когда в крови животных присутствуют макроцитарные гипохромные эритроциты.
Принята классификация анемий по эритроцитарным показателям с учётом среднего эритроцитарного объёма (MCV) и средней концентрации гемоглобина в клетке (МСНС) - см. ниже.
КОЛИЧЕСТВО ЭРИТРОЦИТОВ
В норме содержание эритроцитов в крови у собак 5,2 - 8,4 х 1012/л, у кошек 6,6 - 9,4 х 1012/л.
Эритроцитоз - повышение содержания эритроцитов в крови.
Относительный эритроцитоз - вследствие уменьшения объёма циркулирующей крови или выброса эритроцитов из кровяных депо («сокращение» селезёнки).
Причины:1. Сокращение селезёнки
возбуждение;
физическая нагрузка;
боль.
2. Дегидратация
потеря жидкости (диарея, рвота, избыточный диурез, избыточная потливость);
лишение питья;
повышение сосудистой проницаемости с выходом в такни жидкости и белков.
Абсолютный эритроцитоз - увеличение массы циркулирующих эритроцитов вследствие усиления гемопоэза.
Причины:2. Первичный эритроцитоз
- эритремия - хроническое миелопролиферативное расстройство, возникающее вследствие автономной (независимой от выработки эритропоэтина) пролиферации эритроидных клеток-предшественников в красном костном мозге и поступлением в кровь большого количества зрелых эритроцитов.
3. Вторичные симптоматические эритроцитозы, вызванные гипоксией (с компенсаторным увеличение продукции эритропоэтина):
заболевания лёгких (пневмонии, новообразования и т.д.);
пороки сердца;
наличие аномальных гемоглобинов;
повышенная физическая нагрузка;
пребывание на большой высоте над уровнем моря;
ожирение;
хроническая метгемоглобинемия (редко).
4. Вторичные симптоматические эритроцитозы, связанные с неадекватно повышенной продукцией эритропоэтина:
гидронефроз и поликистоз почек (с местной гипоксией ткани почек);
рак паренхимы почки (выделяет эритропоэтин);
рак паренхимы печени (выделяет подобные эритропоэтину белки).
5. Вторичные симптоматические эритроцитозы, связанные с избытком адренокортикостероидов или андрогенов в организме
синдром Кушинга;
феохромоцитома (опухоль мозгового вещества надпочечников или других хромаффинных тканей, вырабатывающих катехоламины);
гиперальдестеронизм.
Эритроцитопения - снижение количества эритроцитов в крови.
Причины:1. Анемии различного генеза;
2. Увеличение объёма циркулирующей крови (относительная анемия):
гипергидратация;
секвестрация эритроцитов в селезёнке (при её расслаблении во время анестезии, спленомегалия);
гиперпротеинемия;
гемоделюция (разведение крови) в случае опережения расширения сосудистого пространства распределения общей эритроцитарной массы в организме (анемия новорождённых, анемия беременных).
Классификация анемий по эритроцитарным показателям с учётом среднего эритроцитарного объёма (MCV) и средней концентрации гемоглобина в клетке (МСНС)
а) Анемия нормоцитарная нормохромная:1. Острый гемолиз в первые 1-4 дня (до появления в крови ретикулоцитов);
2. Острое кровотечение в первые 1-4 дня (до появления в крови ретикулоцитов в ответ на анемию);
3. Умеренная кровопотеря, которая не стимулирует значительный ответ со стороны костного мозга;
4. Ранний период недостаточности железа (пока нет ещё преобладания микроцитов в крови);
5. Хроническое воспаление (может быть слабая микроцитарная анемия);
6. Хронические неоплазии (может быть слабая микроцитарная анемия);
7. Хроническая болезнь почек (с недостаточностью выработки эритропоэтина);
8. Эндокринная недостаточность (гипофункция гипофиза, надпочечников, щитовидной железы или половых гормонов);
9. Избирательная эритроидная аплазия (врождённая и приобретённая, в том числе как осложнение вакцинации против парвовируса у собак, инфицированных кошачьим вирусом лейкоза кошек, при использовании хлорамфеникола, длительное применение рекомбинантного эритропоэтина человека);
10. Аплазии и гипоплазии костного мозга различного генеза;
11. Отравление свинцом (анемии может не быть);
12. Недостаточность кобаламина (витамина В12) (развивается при врождённом дефекте всасывания витамина, тяжёлой мальабсорбции или дисбактериозе кишечника).
б) Анемия макроцитарная нормохромная:
1. Регенераторная анемия (средняя концентрация гемоглобина в эритроците не всегда снижена);
2. При инфекциях, вызванных кошачьим вирусом лейкоза без ретикулоцитоза (обычно);
3. Эритролейкоз (острый миелоидный лейкоз) и миелодиспластические синдромы;
4. Нерегенераторная опосредованная иммунной системой анемия и/или миелофиброз у собак;
5. Макроцитоз у пуделей (здоровые мини-пудели без анемии);
6. Кошки с гипертиреозом (слабый макроцитоз без анемии);
7. Недостаточность фолатов (фолиевой кислоты) - редко.
в) Анемия макроцитарная гипохромная:
1. Регенеративные анемии с заметным ретикулоцитозом;
2. Наследственный стоматоцитоз у собак (часто слабый ретикулоцитоз);
3. Повышенная осмотическая нестойкость эритроцитов абиссинских и сомалийских кошек (обычно присутствует ретикулоцитоз);
г) Анемия микроциторная или нормоцитарная гипохромная:
1. Хронический дефицит железа (месяцы у взрослых животных, недели у подсосных);
2. Портосистемные шунты (часто без анемии);
3. Анемия при воспалительных заболеваниях (обычно нормоцитарная);
4. Печёночный липидоз у кошек (обычно нормоцитарная);
5. Нормальное состояние для японских догов акита и шиба (без анемии);
6. Длительное лечение рекомбинантным эритропоэтином человека (умеренная анемия);
7. Дефицит меди (редко);
8. Лекарственные препараты или агенты, ингибирующие синтез гемма;
9. Миелопролиферативные расстройства с нарушением обмена железа (редко);
10. Дефицит пиридоксина;
11. Семейное нарушение эритропоэза у английских спрингер-спаниелей (редко);
12. Наследственный эллиптоцитоз у собак (редко).
КОЛИЧЕСТВО ТРОМБОЦИТОВ
В норме количество тромбоцитов у собак 200-700 х 109/л, у кошек 300-700 х 109/л. Физиологические колебания количества тромбоцитов в крови в течение суток - примерно 10%. У здоровых собак породы грейхаунд и кавалер-кинг-чарльз-спаниелей в норме число тромбоцитов меньше, чем у собак других пород (примерно на уровне 100 х 109/л).Тромбоцитоз - увеличение количества тромбоцитов в крови.
1. Первичный тромбоцитоз - является результатом первичной пролиферации мегакариоцитов. Причины: эссенциальная тромбоцитемия (количество тромбоцитов может возрастать до 2000-4000 х 109/л и более);
эритремия;
хронический миелоидный лейкоз;
миелофиброз.
2. Вторичный тромбоцитоз - реактивный, возникающий на фоне какого-либо заболевания в результате увеличенной продукции тромбопоэтина или других факторов (ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-11). Причины:
туберкулёз;
цирроз печени;
остеомиелит;
амилоидоз;
карцинома;
лимфогранулематоз;
лимфома;
состояние после спленэктомии (в течение 2 месяцев);
острый гемолиз;
состояние после операции (в течение 2 недель);
острое кровотечение.
Тромбоцитопения - снижение количества тромбоцитов в крови. Спонтанные кровотечения появляются при 50 х 109/л.
Причины:
I. Тромбоцитопении, связанные со снижением образования тромбоцитов (недостаточность кроветворения).
а) приобретённые
1. Цитотоксическое поражение красного костного мозга:
цитотоксические противоопухолевые химиотерапевтические препараты;
введение эстрогенов (собаки);
цитотоксические лекарственные препараты: хлорамфеникол (кошки), фенилбутазон (собаки), триметоптим-сульфадиазин (собаки), альбендазол (собаки), гризеофульвин (кошки), вероятно - тиацетарсемид, меклофенаминовая кислота и хинин (собаки);
цитотоксические эстрогены, продуцируемые опухолями из клеток Сертоли, интерстициальных клеток и гранулёзоклеточными опухолями (собаки);
повышение концентрации цитотоксических эстрогенов при функционирующих кистозных яичниках (собаки).
2. Инфекционные агенты:
Ehrlichia canis (собаки);
парвовирус (собаки);
инфекция кошачьим вирусом лейкоза (ВЛК-инфекция);
панлейкопения (кошки - редко);
инфекция вирусом иммунодефицита кошек (ВИК-инфекция).
3. Иммуноопосредованные тромбоцитопения с гибелью мегакариоцитов.
4. Облучение.
5. Миелофтиз:
миелогенный лейкоз;
лимфоидный лейкоз;
множественная миелома;
миелодиспластические синдромы;
миелофиброз;
остеосклероз;
метастазирующие лимфомы;
метастазирующие тучноклеточные опухоли.
6. Амегакариоцитарная тромбоцитопения (редко);
7. Длительное применение рекомбинантного тромбопоэтина;
8. Отсутствие эндогенного тромбопоэтина.
б) наследственные
1. Умеренная циклическая тромбоцитопения с волнообразным снижением и повышением продукции тромбоцитов у серых колли с наследственных циклическим гемопоэзом;
2. Тромбоцитопения с появлением макротромбоцитов у кавалер-кинг-чарльз-спаниелей (с бессимптомным течением).
II. Тромбоцитопении, обусловленные повышенной деструкцией тромбоцитов:
1. Иммунообусловленные:
первичная аутоиммунные (идиопатическая) - идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура (может быть в сочетании с аутоиммунной гемолитической анемией - синдром Эванса) - распространена у собак, чаще у самок, породы: кокер-спаниели, карликовые и той пудели, староанглийские и немецкие овчарки;
вторичные при системной красной волчанке, ревматоидном артрите;
вторичные при аллергическая и медикаментозно-аллергическая;
вторичные при инфекционных заболеваниях, сопровождающимися оседанием комплексов антиген-антитело-комплемент на поверхности тромбоцитов (при эрлихиозе, риккетсиоз);
вторичная при хроническом лимфолейкозе.
2. Гаптеновые - связанные с гиперчувствительностью к некоторым лекарствам (медикаментозно-токсические) и уремией;
3. Изоиммунная (посттрансузионная тромбоцитопения);
4. Инфекционные процессы (вирусемии и септицемии, некоторые воспаления).
III. Тромбоцитопении, обусловленные повышенной утилизацией тромбоцитов:
1. ДВС-синдром;
2. Гемангиосаркома (собаки);
3. Васкулиты (к примеру - при вирусном перитоните у кошек);
4. Другие расстройства, вызывающие повреждение эндотелия;
5. Воспалительные процессы (из-за повреждения эндотелия или повышения концентрации воспалительных цитокинов, особенно фактора адгезии и агрегации тромбоцитов);
6. Укусы змей.
IV. Тромбоцитопении, связанные с повышенной секвестрацией тромбоцитов (депонированием):
1. Секвестрация в гемангиоме;
2. Секвестрация и разрушение в селезенке при гиперспленизме;
3. Секвестрации и разрушение в селезёнке при спленомегалии (при наследственных гемолитических анемиях, аутоиммунных болезнях, инфекционных болезнях, лимфоме селезёнки, застойных явлениях в селезёнке, миелопролиферативных заболеваниях со спленомегалией и др.);
4. Гипотермия.
V. Тромбоцитопении, связанные с наружными кровотечениями:
1. Острые кровотечения (незначительная тромбоцитопения);
2. Массивные кровепотери, связанные с отравление родентицитами-антикоагулянтами (выраженные тромбоцитопении у собак);
3. При трансфузии обеднённой тромбоцитами донорской крови или эритроцитарной массы животным, перенесшим большую кровопотерю.
Псевдотромбоцитопения - может быть при использовании для подсчёта тромбоцитов автоматических счётчиков.
Причины:
1. Образование агрегатов тромбоцитов;
2. У кошек, так как их тромбоциты очень крупные по размерам, и прибор не может надёжно отличать их от эритроцитов;
3. У кавалер-кинг-чарльз-спаниелей - в их крови в норме присутствуют макротромбоциты, которые прибор не отличает от мелких эритроцитов.
КОЛИЧЕСТВО ЛЕЙКОЦИТОВ
Содержание лейкоцитов в норме у собак 6,6-9,4 х 109/л, у кошек 8-18 х 109/л.Количество лейкоцитов зависит от скорости притока клеток из костного мозга и скорости выхода их в ткани.
Лейкоцитоз - увеличение количества лейкоцитов выше пределов нормы.
Основные причины:
1. Физиологический лейкоцитоз (обусловлен выделением катехоламинов - появляется через 2-5 минут и удерживается в течение 20 минут или часа; количество лейкоцитов на высшем пороге нормы или чуть выше, лимфоцитов больше, чем полиморфноядерных лейкоцитов):
страх;
возбуждение;
грубое обращение;
физические нагрузки;
судороги.
2. Стрессовый лейкоцитоз (обусловлен повышением количества экзогенных или эндогенных глюкокортикоидов в крови; реакция развивается в течение 6 часов и продолжается сутки и более; наблюдают нейтрофилию со сдвигом влево, лимфопению и эозинопению, на поздних стадиях - моноцитоз):
травмы;
хирургические операции;
приступы боли;
злокачественные новообразования;
спонтанная или ятрогенная болезнь Кушинга;
вторая половина беременности (физиологический со сдвигом вправо).
3. Воспалительный лейкоцитоз (нейтрофилия с левым сдвигом, количество лейкоцитов на уровне 20-40х109; в нейтрофилах часто токсические и неспецифические изменения - тельца Дёле, диффузная цитоплазматическая базофилия, вакуолизация, пурпурные цитоплазматические зёрна):
инфекции (бактериальные, грибковые, вирусные и др.);
травмы;
некрозы;
аллергии;
кровотечения;
гемолиз;
воспалительные состояния;
острые местные гнойные процессы.
4. Лейкозы;
5. Уремия;
6. Неадекватные реакции лейкоцитов
в виде дегенеративного сдвига влево (количество несегментированных превышает количество полиморфных); левого сдвига и нейтропении; лейкемоидной реакции (явный лейкоцитоз с сильным левым сдвигом, включая мегамиелоциты, миелоциты и промиелоциты) с моноцитозом и монобластозом:
- тяжёлые гнойные инфекции;
- грамотрицательный сепсис.
в виде эозинофилии - гиперэозинофильный синдром (кошки).
Лейкопения - уменьшение количества лейкоцитов меньше пределов нормы.
Чаще лейкопению вызывает нейтропения, но бывают лимфопении и панлекопении.
Наиболее частые причины:
1. Снижение количества лейкоцитов в результате уменьшения гемопоэза:
инфекция вирусом лейкоза кошек (кошки);
инфекция вирусом иммунодефицита кошек (кошки);
вирусный энтерит кошек (кошки);
парвовирусный энтерит (собаки);
панлейкопения кошек;
гипоплазия и аплазия костного мозга;
повреждение костного мозга химическими средствами, лекарственными препаратами и т.д. (см. причины нерегенераторных анемий, сопровождающихся лейкопенией и тромбоцитопенией (панцитопенией));
миелопролиферативные заболевания (миелодиспластические синдромы, острый лейкоз, миелофиброз);
миелофтиз;
приём цитотоксических препаратов;
ионизирующее облучение;
острые лейкозы;
метастазы новообразований в костный мозг;
циклическая лейкопения у мраморно-голубых колли (наследственная, связанная с циклическим гемопоэзом)ю
2. Лейкоцитарная секвестрация:
эндотоксический шок;
септический шок;
анафилактический шок.
3. Повышенная утилизация лейкоцитов:
виремия;
тяжёлые гнойные инфекции;
токсоплазмоз (кошки).
4. Повышенное разрушение лейкоцитов:
грамотрицательный сепсис;
эндотоксический или септический шок;
ДВС-синдром;
гиперспленизм (первичный, вторичный);
иммуннообусловленная лейкопения
5. Результат действия лекарственных препаратов (может быть сочетание разрушения и снижения продукции):
сульфаниламиды;
некоторые антибиотики;
нестероидные противовоспалительные препараты;
тиреостатики;
противоэпилептические препараты;
антиспазматические пероральные препараты.
Уменьшение или увеличение лейкоцитов в крови может быть как за счёт отдельных видов лейкоцитов (чаще), так и общее при сохранении процентного соотношения отдельных видов лейкоцитов (реже).
Увеличение или уменьшение числа отдельных видов лейкоцитов в крови может быть абсолютным (с уменьшением или увеличением общего содержания лейкоцитов) или относительным (при нормальном общем содержанием лейкоцитов).
Определить абсолютное содержание отдельных видов лейкоцитов в единице объёма крови можно умножив общее содержание лейкоцитов в крови (х109) на содержание определённого вида лейкоцитов (%) и разделив полученное число на 100.
ЛЕЙКОЦИТАРНАЯ ФОРМУЛА КРОВИ
Лейкоцитарная формула - процентное соотношение разных видов лейкоцитов в мазке крови.Лейкоцитарная формула кошек и собак в норме
Клетки Процент от количества всех лейкоцитов
Собаки Кошки
Миелоциты 0 0
Метамиелоциты (юные) 0 0 - 1
Палочкоядерные нейтрофилы 2 - 7 1 - 6
Сегментоядерные нейтрофилы 43 - 73 40 - 47
Эозинофилы 2 - 6 2 - 6
Базофилы 0 - 1 0 - 1
Моноциты 1 - 5 1 - 5
Лимфоциты 21 - 45 36 - 53
При оценке лейкоцитарной формулы необходимо учитывать и абсолютное содержание отдельных видов лейкоцитов (см. выше).
Сдвиг влево - изменение лейкограммы с увеличением процентного содержания молодых форм нейтрофилов (палочкояденых нейтрофилов, метамиелоцитов, миелоцитов).
Причины:
1. Острые воспалительные процессы;
2. Гнойные инфекции;
3. Интоксикации;
4. Острые геморрагии;
5. Ацидоз и коматозные состояния;
6. Физическое перенапряжение.
Регенеративный сдвиг влево
- количество палочкоядерных нейтрофилов меньше количества сегментоядерных нейтрофилов, общее количество нейтрофилов повышено.
Дегенератирный сдвиг влево
- количество палочкоядерных нейтрофилов превышает количество сегментоядерных нейтрофилов, общее количество нейтрофилов в норме или существует лейкопения. Результат повышенной потребности в нейтрофилах и\или повышенного их разрушения, ведущего к разрушению костного мозга. Признак того, что костный мозг не может удовлетворить возросшую потребность в нейтрофилах краткосрочно (несколько часов) или долгосрочно (несколько дней).
Гипосегментация
- сдвиг влево, обусловленный присутствием нейтрофилов, имеющих конденсированный ядерный хроматин зрелых нейтрофилов, но иное по сравнению со зрелыми клетками строение ядра.
Причины:
аномалия Пельгера - Хьюина (наследственный признак);
преходящая псевдоаномалия при хронических инфекциях и после введения некоторых лекарственных веществ (редко).
Сдвиг влево с омоложением - в крови присутствуют метамиелоциты, миелоциты, промиелоциты, миелобласты и эритробласты.
Причины:
1. Хронические лейкозы;
2. Эритролейкоз;
3. Миелофиброз;
4. Метастазы новообразований;
5. Острые лейкозы;
6. Коматозные состояния.
Сдвиг вправо (гиперсегментация)
- изменение лейкограммы с увеличение процентного содержания сегментоядерных и полисегментоядерных форм.
Причины:
1. Мегалобластная анемия;
2. Болезни почек и сердца;
3. Состояния после переливания крови;
4. Выздоровление от хронического воспаления (отражает увеличенное время пребывания клеток в крови);
5. Экзогенный (ятрогенный) подъём уровня глюкокортикоидов (сопровождается нейтрофилезом; причина - задержка миграции лейкоцитов в ткань вследствие сосудоуплотняющего воздействия гликокортикоидов);
6. Эндогенный (стрессовые ситуации, синдром Кушинга) подъём уровня глюкокортикоидов;
7. Старые животные;
8. Собаки с наследственным дефектом абсорбции кобаламина;
9. Кошки с дефицитом фолатов.
НЕЙТРОФИЛЫ
Около 60% всех нейтрофилов находится в красном костном мозге, около 40% - в тканях и менее 1% циркулирует в крови. В норме в крови подавляющее число нейтрофилов представлено сегментоядерными нейтрофилами. Длительность полупериода циркуляции нейтрофильных гранулоцитов в крови 6,5 часов, затем они мигрируют в ткани. Время жизни в тканях колеблется от нескольких минут до нескольких дней.Содержание нейтрофилов
(абсолютное и относительное - процентное количество от всех лейкцитов)
в крови в норме
Вид Предел колебания, х109/л Процент нейтрофилов
Собаки 2,97 - 7, 52 45 - 80
Кошки 3,28 - 9,72 41 - 54
Нейтрофилёз (нейтрофилия)
- увеличение содержания нейтрофильных лейкоцитов в крови выше верхних границ нормы.
Может развиться как результат повышенной продукции нейтрофилов и/или выхода их из костного мозга; снижения миграции нейтрофилов из кровотока в ткани; снижение перехода нейтрофилов из краевого в циркулирующий пул.
а) Физиологическая нейтрофилия
- развивается при выбросе адреналина (снижается переход нейтрофилов из краевого в циркулирующий пул). Чаще всего обусловливает физиологический лейкоцитоз. Сильнее выражена у молодых животных. Число лимфоцитов при этом нормальное (у кошек может повышаться), сдвига влево нет, количество нейтрофилов повышается не более, чем в 2 раза.
Причины:
1. Физические нагрузки;
2. Судороги;
3. Испуг;
4. Возбуждение.
б) Стрессовая нейтрофилия - при повышенной эндогенной секреции глюкокортикоидов или при их экзогенном введении. Обусловливает стрессовый лейкоцитоз. Глюкокортикоиды повышают выход зрелых лейкоцитов из костного мозга и задерживают их переход из крови в ткань. Абсолютное число нейтрофилов редко повышается более, чем в двое, по сравнению с нормой, сдвиг влево отсутствует или слабый, часто бывает лимфопения, эозинопения и моноцитоз (чаще - у собак). Со временем количество нейтрофилов падает, но лимфопения и эозинопения персистируют до тех пор, пока концентрация глюкокортикоидов в крови остаётся повышенной.
Причины:
1. Повышенная эндогенная секреция глюкокортикоидов:
боль;
длительный эмоциональный стресс;
ненормальная температура тела;
гиперфункция коры надпочечников (синдром Кушинга).
2. Экзогенное введение глюкокортикоидов.
в) Воспалительная нейтрофилия
- часто основной компонент воспалительного лейкоцитоза. Часто присутствует сдвиг влево - сильный или незначительный, число лимфоцитов часто снижено.
Причины крайне высокого нейтрофилёза
(свыше 25х109/л) при высоком лейкоцитозе (до 50х109/л):
1. Локальные тяжёлые инфекции:
пиометра, пиотеракс, пиелонефрит, септический перитонит, абсцессы, пневмония, гепатит.
2. Иммуноопосредованные расстройства:
иммуноопосредованная гемолитическая анемия, полиартрит, васкулит.
3. Опухолевые заболевания
лимфома, острый и хронический лейкоз, тучноклеточная опухоль.
4. Болезни, сопровождающиеся обширными некрозами
в течение 1-2 дней после операции, травмы, панкреатит, тромбоз и желчный перитонит.
5. Первые 3 недели после введения токсичной дозы эстрогена (собаки, в последующем развивается генерализованная гипоплазия или аплазия костного мозга и панлейкопения).
Лейкемоидная реакция нейтрофильного типа
- резкое увеличение количества нейтрофильных лейкоцитов в крови (выше 50х109/л) с появление большого количества элементов кроветворения, вплоть до миелобластов. Напоминает лейкозы по степени увеличения числа лейкоцитов или по морфологии клеток.
Причины:
1. Острые бактериальные пневмонии;
2. Злокачественные опухоли с множественными метастазами в костный мозг (с лейкоцитозом и без):
рак паренхимы почки;
рак предстательной железы;
рак молочной железы.
Нейтропения
- снижение абсолютного содержания нейтрофилов в крови ниже нижнего предела нормы. Часто именно абсолютная нейтропения является причиной лейкопении.
а) Физиологическая нейтропения
- у собак породы бельгийский тервурен (совместно со снижением общего числа лейкоцитов и абсолютного числа лимфоцитов).
б) Нейтропения
, связанная с уменьшением выхода нейтрофилов из красного костного мозга (обусловленная дисгранулопоэзом - уменьшением числа клеток-предшественников или нарушением их созревания):
1. Миелотоксические влияния и супрессия гранулоцитопоэза (без сдвига лейкоцитарной формулы):
некоторые формы миелолейкоза, отдельные миелодиспластические синдромы;
миелофтиз (при лимфолейкозе, некоторых миелодиспластических синдромах, миелофиброзе (часто ассоциированном с анемией, реже с лейкопенией и тромбоцитопенией), остеосклерозе, в случае лимфом, карцином и тучноклеточных опухолей);
у кошек инфекции, вызванные кошачьим вирусом лейкоза, вирусом иммунодефицита кошачьих (вместе с лейкопенией);
токсический эффект на эндогенный (гормонпродуцирующие опухоли) и эндогенный эстроген у собак;
ионизирующая радиация;
противоопухолевые препараты (цитостатики и иммунодепрессанты);
некоторые лекарственные вещества (хлорамфеникол)
инфекционные агенты - ранняя стадия вирусной инфекции (инфекционный гепатит и парвовирус собак, панлейкопения кошек, инфекция Ehrlichia canis у собак);
карбонат лития (задержка созревания нейтрофилов в костном мозге у кошек).
2. Иммунная нейтропения:
изоиммунный (посттрансфузионный).
в) Нейтропения, связанная с перераспределением и секвестрацией в органах:
1. Спленомегалия различного генеза;
2. Эндотоксический или септический шок;
3. Анафилактический шок.
г) Нейтропения, связанная с повышенной утилизацией нейтрофилов (часто с дегенеративным сдвигом лейкоцитарной формулы влево):
1. Бактериальные инфекции (бруцеллёз, сальмонеллёз, туберкуллёз);
2. Тяжёлые гнойные инфекции (перитониты после перфорации кишечника, вскрывшиеся внутрь абсцессы);
3. Септицемии, вызванные грамотрицательными бактериями;
4. Аспирационные пневмонии;
5. Эндотоксический шок;
6. Токсоплазмоз (кошки)
д) Нейтропения, связанная с повышенным разрушением нейтрофилов:
1. Гиперспленизм;
2. Тяжёлые септические состояния и эндотоксемия (с дерегенеративным сдвигом влево);
3. ДВС-синдром.
е) Наследственные формы:
1. Наследственный дефицит всасывания коболамина (собаки - совместно с анемией);
2. Циклический гемопоэз (у мроморно-голубых колли);
3. Синдром Чедиака-Хигаши (у персидских кошек с частичным альбинизмом - светло-желтыми глазами и дымчато-голубой шерстью).
Кроме вышеперечисленных случаев, нейтропения может развиться непосредственно после острой кровопотери. Нейтропения, сопровождающая нерегенеративную анемию указывает на хроническое заболевание (например, риккетсиоз) или процесс, связанный с хронической потерей крови.
Агранулоцитоз
- резкое уменьшение числа гранулоцитов в периферической крови вплоть до полного их исчезновения, ведущее к снижению сопротивляемости организма к инфекции и развитии бактериальных осложнений.
1. Миелотоксический - развивается в результате действия цитостатических факторов, сочетается с лейкопенией, тромбоцитопенией и, нередко, с анемией (т.е. с панцитопенией).
2. Иммунный
гаптеновый (идиосинкразии на лекарственные вещества) - фенилбутазон, триметоприм\сульфадиазин и другие сульфаниламиды, гризеофульвин, цефалоспорины;
аутоиммунный (при системной красной волчанке, хронической лимфолейкозе);
изоиммунный (посттрансфузионный).
ЭОЗИНОФИЛЫ
Эозинофилы - клетки, фагоцитирующие комплексы антиген-антитело (IgЕ). После созревания в костном мозге циркулируют в крови около 3-4 часов, затем мигрируют в ткани, где проживают приметно8 - 12 дней. Характерен суточный ритм колебания в крови: самые высокие показатели ночью, самые низкие - днём.
Эозинофилия - повышение уровня эозинофилов в крови.
Причины:
Эозинопения - снижение содержания эозинофилов в крови ниже нижнего предела нормы. Понятие относительное, так как могут отсутствовать в норме у здоровых животных.
Причины:
1. Экзогенное введение глюкокортикоидов (секвестрация эозинофилов в костном мозге);
2. Повышение адренокортикоидной активности (синдром Кушинга первичный и вторичные);
3. Начальная фаза инфекционно-токсического процесса;
4. Тяжёлое состояние больного в послеоперационный период.
БАЗОФИЛЫ
Продолжительность жизни 8-12 суток, время циркуляции в крови - несколько часов.Главная функция - участие в реакциях гиперчувствительности немедленного типа. Кроме того - участвуют в реакциях гиперчувствительности замедленного типа (через лимфоциты), в воспалительных и аллергических реакциях, в регуляции проницаемости сосудистой стенки.
Содержание базофилов
в крови в норме.
Вид Предел колебания, х109/л Процент базофилов
Собаки 0 - 0,094 0 - 1
Кошки 0 - 0,18 0 - 1
ЛИМФОЦИТЫ
Лимфоциты являются главным клеточным элементом иммунной системы, образуются в костном мозге, активно функционируют в лимфоидной ткани. Главная функция - распознавание чужеродного антигена и участие в адекватном иммунологическом ответе оганизма.Содержание лимфоцитов
(абсолютное и относительное - процентное количество от всех лейкоцитов)
в крови в норме.
Вид Предел колебания, х109/л Процент лимфоцитов
Собаки 1,39 - 4,23 21 - 45
Кошки 2,88 - 9,54 36 - 53
Абсолютный лимфоцитоз - увеличение абсолютного количества лимфоцитов в крови выше пределов нормы.
Причины:
1. Физиологический лимфоцитоз - повышенное содержание лимфоцитов в крови у новорождённых и молодых животных;
2. Выброс адреналина (особенно кошки);
3. Вирусные инфекции хронические (относительно редко, чаще относительный) или вирусемии;
4. Реакция на вакцинацию у молодых собак;
5. Хроническая антигенная стимуляция из-за бактериальных воспалений (при бруцеллёзе, туберкулёзе);
6. Хронические аллергические реакции (IV типа);
7. Хронический лимфолейкоз;
8. Лимфома (редко);
9. Острый лимфобластный лейкоз.
Абсолютная лимфопения - снижение абсолютного количества лимфоцитов в крови ниже пределов нормы.
Причины:
1. Повышение концентрации эндогенных и экзогенных глюкокортикоидов (с одновременным моноцитозом, нейтрофилёзом и эозинопенией):
лечение глюкокортикоидами;
первичный и вторичный синдром Кушинга.
2. Вирусные заболевания (парвовирусный энтерит собак, панлейкопения кошек, чума плотоядных; инфекция вирусом лейкоза кошек и вирусом иммунодефицита кошек и т.д.);
3. Начальные стадии инфекционно-токсического процесса (из-за миграции лимфоцитов из крови в ткани к очагам воспаления);
4. Вторичные иммунные дефициты;
5. Все факторы, которые могут вызвать снижение гемопоэтической функции костного мозга (см. лейкопении);
6. Иммунодепрессанты;
7. Облучение костного мозга и иммунных органов;
8. Хроническая уремия;
9. Сердечная недостаточность (недостаточность кровообращения);
10. Потеря богатой лимфоцитами лимфы:
лимфангиоэктазия (потеря афферентной лимфы);
разрыв грудного протока (потеря эфферентной лимфы);
лимфатические отёки;
хилоторакс и хиласцит.
11. Нарушение структуры лимфоузлов:
мультицентрическая лимфома;
генерализованное гранулематозное воспаление
12. После стресса в течение долгого времени вместе с эозинопенией - признак недостаточного отдыха и плохого прогноза;
13. Миелофтиз (вместе со снижением содержания других лейкоцитов и анемией).
МОНОЦИТЫ
Моноциты относятся к системе мононуклеарных фагоцитов.Не формируют костномозгового резерва (в отличие от других лейкоцитов), циркулируют в крови от 36 до 104 часов, затем мигрируют в ткани, где дифференцируются в органо- и тканеспецифичные макрофаги.
Содержание моноцитов
(абсолютное и относительное - процентное количество от всех лейкоцитов)
в крови в норме.
Вид Предел колебания, х109/л Процент моноцитов
Собаки 0,066 - 0,47 1 - 5
Кошки 0,08 - 0,9 1 - 5
Моноцитоз - увеличение числа моноцитов в крови.
Причины:
1. Инфекционные болезни:
период выздоровления после острых инфекций;
грибковые, риккетсионые инфекции;
2. Гранулематозные болезни:
туберкулёз;
бруцеллёз.
3. Болезни крови:
острый монобластный и миеломонобластный лейкоз;
хронический моноцитарный и миеломоноцитарный лейкоз.
4. Коллагенозы:
системная красная волчанка.
5. Острые воспалительные процессы (с нейтрофилёзом и сдвигом влево);
6. Хронические воспалительные процессы (с нормальным уровнем нейтрофилов и/или без сдвига влево);
7. Некрозы в тканях (воспалительные или в опухолях);
8. Повышение эндогенных или введение экзогенных глюкокортикоидов (у собак, вместе с нейтрофилёзом и лимфопенией);
9. Токсические, сверхостные воспалительные или тяжёлые вирусные инфекции (парвовирусный энтерит собак) - совместно с лейкопенией.
Моноцитопения - уменьшение числа моноцитов в крови. Моноцитопению оценить трудно из-за низкого содержания моноцитов в крови в норме.
Снижение количества моноцитов наблюдают при гипоплазии и аплазии костного мозга (см. лейкопения).
ПЛАЗМОЦИТЫ
Плазматические клетки - клетки лимфоидной ткани, продуцирующие иммуноглобулины и развивающиеся из клеток-предшественников В-лимфоцитов через более молодые стадии.В норме в периферической крови плазмоцитов нет.
Причины появления плазмоцитов в периферической крови:
1. Плазмоцитома;
2. Вирусные инфекции;
3. Длительная персистенция антигена (сепсис, туберкулёз, актиномикоз, аутоиммунные болезни, коллагенозы);
4. Новообразования.
СКОРОСТЬ ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ (СОЭ)
Скорость оседания эритроцитов в плазме прямо пропорциональна массе эритроцитов, разнице в плотности эритроцитов и плазмы и обратно пропорциональна вязкости плазмы.В норме СОЭ у собак 2,0-5,0 мм/час, у кошек 6,0-10,0 мм/час.
Ускоряют СОЭ:
1. Образование монетных столбиков и агглютинация эритроцитов (увеличивается масса оседающих частиц) из-за потери отрицательного заряда на поверхности эритроцитов:
повышение концентрации некоторых белков крови (особенно фибриногена, иммуноглобулинов, гаптоглобина);
алкалоз крови;
наличие антиэритроцитарных антител.
2. Эритропения.
3. Снижение вязкости плазмы.
Заболевания и состояния, сопровождающиеся ускорением СОЭ:
1. Беременность, послеродовой период;
2. Воспалительные заболевания различной этиологии;
3. Парапротеинемии (множественная миеломная болезнь - особенно выраженная СОЭ до 60-80 мм/час);
4. Опухолевые заболевания (карцинома, саркома, острый лейкоз, лимфома);
5. Болезни соединительной ткани (коллагенозы);
6. Гломерулонефрит, амилоидоз почек, протекающие с нефротическим синдромом, уремия);
7. Тяжёлые инфекционные болезни;
8. Гипопротеинемии;
9. Анемии;
10. Гипер- и гипотиреоз;
11. Внутренние кровотечения;
12. Гиперфибриногенемия;
13. Гиперхолестеринемия;
14. Побочные действия лекарств: витамина А, метилдофа, декстрана.
Лейкоцитоз, повышение СОЭ и соответствующие изменения лейкоцитарной формулы - достоверный признак наличия в организме инфекционных и воспалительных процессов.
Замедляют СОЭ:
1. Ацидоз крови;
2. Повышение вязкости плазмы
3. Эритроцитоз;
4. Выраженное изменение формы и размеров эритроцитов (серповидность, сфероцитоз, анизоцитоз - так как форма клеток препятствует образованию монетных столбиков).
Заболевания и состояния, сопровождающиеся замедлением СОЭ:
1. Эритремии и реактивные эритроцитозы;
2. Выраженные явления недостаточности кровообращения;
3. Эпилепсия;
4. Серповидно-клеточная анемия;
5. Гиперпротеинемия;
6. Гипофибриногенемия;
7. Механические желтухи и паренхиматозные желтухи (предположительно, связано с накоплением в крови желчных кислот);
8. Приём кальция хлорида, салицилатов и препаратов ртути.
ЗАНЯТИЕ 17. Получение крови, определение скорости оседания эритроцитов и ретракции кровяного сгустка
Место проведения занятия-клиника и лаборатория.
Цель занятия:
Овладеть техникой взятия крови у животных.
Научиться определять скорость оседания эритроцитов и ретракцию кровяного сгустка.
Показатели СОЭ у разных видов животных и отклонения.
Показатели индекса ретракции кровяного сгустка у лошади и крупного рогатого скота и при патологии.
Для получения большого количества крови её берут у КРС, овец, коз, лошадей из яремной вены с помощью кровопускательных игл, у свиней-из хвоста, хвостовой артерии и крониальной полой вены.
Небольшое количество крови можно получить у животных из кровеносных сосудов уха, у кур-из гребня или серёжек.
Определение скорости оседания эритроцитов
по Неводову
В эритроседиометр отвешивается 0,04 г натрия цитрата в порошке, затем набирают в него крови до «0» из яремной вены (предварительно подготовив поле). Осторожно переворачивают эритроседиометр до полного растворения порошка. Если крови больше «0», то излишек отсасывают пипеткой. Установив пробирку в штатив, наблюдают за ходом реакции через каждые 15 минут в течение часа, затем отмечают через 24 часа.
По Панченкову
В капилляр, после промывания свежеприготовленным 5 % раствором лимоннокислого натрия, набирают того же раствора до метки Р или до деления 50 и выпускают на часовое стекло или в пробирку, затем дважды набирают кровь до метки «К» или дел. 100 и выпускают на то же часовое стекло или в пробирку, смешивают и смесь набирают без пузырьков воздуха в другой, промытый лимоннокислым натрием,капилляр, который устанавливают в штатив и наблюдают за ходом реакции. Учитывают СОЭ через 1 час и выражают в миллиметрах.
У здоровых животных показатели за час составляют: у КРС-0,5-1,5; у овец-0,5-1,0; у лошадей-40-70; у свиней-2-9; у собак-2-6; у кур-2-3 мм.
Определение ретракции кровяного сгустка
по П. В. Каймакову
Кровь в количестве 10 мл набирают в хорошо вымытую и очищенную спиртом и эфиром сухую пробирку и отстаивают 24 часа при комнатной температуре.
По истечении 24 часов отстоявшуюся сыворотку отсасывают пипеткой и измеряют её количество в мерной пробирке, после чего определяют индекс ретракции (И.Р.) путём деления количества сыворотки на первоначальный объём крови.
Пример: крови взято 10 мл, а сыворотки 5 мл
И. Р. 10 = 0,5
И. Р. у лошади колеблется от 0,3 до 0,7 в среднем-0,53
У КРС равен 0,4-0,6.
Результаты исследования.
Показатели скорости оседания эритроцитов:
через 15 минут
через 30 минут
через 45 минут
через 1 час
через 24 часа
Индекс ретракции кровяного сгустка
Заключение
Иглы для взятия крови
Настойка Йода
Спирт-эфир
Таблицы с показателями СОЭ и ИР у животных
Учебное оборудование, демонстрационный материал, животные
Пробирки Неводова или эритроседиометры
Аппарат Панченкова
Натрий цитрат
5 % раствор натрия цитрата
Пробирки диаметром 1,5 см
Животные: КРС, лошади, поросята
VIII. Оценка выполненной работы студента преподавателем.
ЗАНЯТИЕ 18. Подсчёт количества эритроцитов, определение гемоглобина в крови и цветового показателя
Место проведения занятия-клиника, лаборатория.
Цель занятия-освоить методики подсчёта эритроцитов и определения гемоглобина.
Текущий опрос студентов по следующим вопросам:
Показатели эритроцитов и гемоглобина у разных видов животных.
Их отклонения при различных физиологических и патологических состояниях.
Объяснение методики выполнения работы преподавателем.
Выполнение работы студентами.
Подсчёт количества эритроцитов.
Кровь набирают в смеситель до метки 0,5 или 1. Конец меланжера обтирают от крови, затем в капилляр до метки 101 набирают физиологический раствор. Получается разведение в 200 или 100 раз. Когда смеситель наполнен кровью и физиологическим раствором, концы его зажимают между большим и указательным пальцами и несколько раз энергично встряхивают.
Перед заряжением камеры содержимое смесителя вновь тщательно перемешивается и вводится под покровное стекло. Чтобы высота камеры не изменялась, необходимо покровное стекло плотно протереть до образования т.н. ньютоновских колец.
Заряженная камера помещается под микроскоп без иммерсии. Подсчёт эритроцитов начинают с квадрата, расположенного в левом углу, затем переходят к другим квадратам.
Подсчитывать нужно в 5 больших квадратах все эритроциты, лежащие внутри квадрата, и на его внутренних линиях.
Подсчитанные эритроциты в пяти больших квадратах суммируют и определяют содержание количества эритроцитов в 1 куб. мм. крови по следующей формуле: М . 4 000 . у
Количество эритроцитов Х равно количеству подсчитанных клеток в пяти больших квадратах М. умноженному на 4 000 и степень разведения у, разделённому на 80 (число малых квадратиков).
Объём одного малого квадратика равен 1\ 4 000 куб. м., а поэтому, чтобы получить количество в 1 куб. мм. необходимо число эритроцитов умножить на 4 000.
Расчёт нужно производить следующим образом: количество эритроцитов в 5 квадратах умножается на 10 000 при разведении на 200 и
на 5 000 при разведении на 100.
Пробирочный метод подсчёта эритроцитов.
В чистую пробирку Флоринского наливают 4 мл физраствора. Кровь набирают в пипетку от гемометра Сали 0,02 мл, осторожно выдувают в пробирку с физраствором, промывают пипетку, закрывают пробкой и тщательно перемешивают. Разведение 1:200.
Кровь, взятую в пробирку перед заполнением камеры, встряхивают несколько раз. Камеру заполняют с помощью пастеровской пипетки или концом круглой стеклянной палочки, важно, чтобы вся поверхность, на которой нанесена сетка, была заполнена жидкостью. Расчёт производят обычным способом с учётом разведения.
В связи с переходом к применению в клинической лабораторной диагностике Международной системы единиц СИ в практикуме наряду со старыми физическими единицами приведены также новые единицы. Например: вместо выражения количества эритроцитов в млн/мкл и лейкоцитов в тыс/мкл число эритроцитов следует обозначать в 10 12 л, а лейкоцитов-в 10 9 л.
Количество эритроцитов у взрослых здоровых животных в млн/мкл или 10 12 л;
КРС 4,5-7,5; овцы-7,6-11,2; лошади-5,5-9,0; свиньи-4,0-7,5; собаки-5,2–8,4; куры-2,5–5,0.
Определение гемоглобина. Способ Сали
В градуированную пробирку при помощи пипетки отмеряют до 10-го деления или до круговой метки с цифрой 2 гр проц. децинормального раствора соляной кислоты. В капилляр до 20 мм набирают кровь и осторожно, очистив конец капилляра переносят кровь в пробирку с децинормальным раствором НСl, чтобы на стенках капилляра не осталось следов крови, ещё раза три споласкивают той же кислотой стараясь не пенить жидкость.
Кровь гемолизируется и образуется соляно-кислый гематин.
Спустя 5-7 минут в пробирку добавляют дистиллированной воды. Доводя окраску до стандарта.
Цифра, соответствующая уровню жидкости по нижнему мениску в пробирке, показывает количество гемоглобина по Сали или г\100 мл.
Определение цветового показателя
Цветовой показатель вычисляется по формуле:
где ЦП-цветовой показатель;
Н1-среднее количество гемоглобина в норме, г в 100 мл (или г \ л);
Н2-количество гемоглобина у исследуемого животного, г в 100 мл (или г \л);
Е1-среднее количество эритроцитов в норме млн \ мкл (или 10 12 \л);
Е2-количество эритроцитов у исследуемого животного, мдн\мкл
(или 10 12 \л).
Цветовой показатель крови у здоровых животных составляет: у КРС-0,7-1,1; у овец-0,5-0,7; у лошадей-0,8-1,2 у свиней-0,8-1,0; у собак-0,8-1,2; у кур-2-3.
Результаты определения:
Эритроциты.
Гемоглобин.
Цветовой показатель.
Заключение.
Микроскоп.
Счётная камера Горяева.
Смеситель для эритроцитов.
Физиологический раствор.
Покровные стёкла.
Гемоглобинометр Сали.
Дистиллированная вода.
Децинормальный раствор соляной кислоты.
Пипетки градуированные на 1 и 5 мл, пипетки от гемометра Сали.
Таблицы с показателями эритроцитов и гемоглобина у животных.
Животные: КРС, лошади, поросят.
ЗАНЯТИЕ 19.Подсчёт количества лейкоцитов. Приготовление и окраска мазков. Выведение гемограммы, гематологического и лейкоцитарного профиля
Место проведения занятия-клиника и лаборатория кафедры.
Цель занятия:
Освоить методику подсчёта лейкоцитов.
Приобрести навыки приготовления и окраски мазков.
Вывести лейкоцитарные формулы разных видов животных.
Определить лейкоцитарный профиль у крупного рогатого скота.
Текущий опрос студентов по следующим вопросам:
Показатели лейкоцитов у разных видов животных.
Их изменения в зависимости от некоторых физиологических и патологических состояний.
Понятие о лейкоцитарной формуле и лейкоцитарном профиле.
Показатели лейкоцитарной формулы у крупного рогатого скота и лошадей.
Морфологические изменения лейкоцитов.
Объяснение методики выполнения работы преподавателем.
Выполнение работы студентами.
Подсчёт количества лейкоцитов.
Кровь набирают в смеситель или меланжер до черты 0,5 или 1 (из уха или цитратной крови). Затем в этот же меланжер набирают 2% раствор уксусной кислоты до метки 11, получается разведение в 20 раз. После тщательно перемешивают, первые две капли удаляют из смесителя и каплю средней величины вводят под покровное стекло к камере (ранее притёртое). Критерием притёртости стекла к камере служит образование ньютоновских колец. Правило подсчёта-заряженная камера помещается под микроскоп без иммерсии. Лейкоциты подсчитывают в 100 больших квадратах (т.е. 1600 малых). Допустимо считать 75 больших квадратов (т.е. 1200 малых).
а х 4000 х в
Формула для подсчёта: Х =
где Х-искомое количество форменных элементов в 1 м 3 ;
а-сумма форменных элементов, сосчитанных в определённом объёме камеры;
б-количество сосчитанных малых квадратов;
в-разведение крови.
Объём малого квадрата равен 1\100 мм 3 , то в 1 мм 3 крови их будет в 400 раз больше.
Пример: (разведение крови в 20 раз).
В 1600 малых квадратах (т. е. 100 больших) сосчитано 150 лейкоцитов, тогда в 1 м 3 будет:
150 х 4000 х 20
1600 = 150 х 50 = 7500
т.е. сумму лейкоцитов, сосчитанных в 100 больших квадратах, надо умножать на 50.
Подсчёт лейкоцитов (пробирочный метод)
В чистую пробирку отмеривают пипеткой 0,4 мл раствора уксусной кислоты. Кровь набирают пипеткой от гемометра Сали-0,02 мл и осторожно переносят её в пробирку с 3 % уксусной кислотой. Разведение 1:20. Камеру заполняют с помощью пастеровской или концом круглой стеклянной палочки, важно, чтобы вся поверхность сетки была заполнена жидкостью. Расчёт производят обычным способом с учётом разведения.
Количество лейкоцитов у взрослых здоровых животных (тыс.\мкл или 10 9 \л); у КРС-6,5-9,5; у овец-6,6-10,6; у лошадей-7,0-12,0; у свиней-6,7-23,0; у собак-8,5-10,5; у кур-20,0-40,0.
Выведение лейкоцитарной формулы .
Подсчёт отдельных классов лейкоцитов ведётся под микроскопом с иммерсией. Всего в мазке должно быть подсчитано не менее 100 клеток, лучше 200. Существуют методы подсчёта по Меандру-4-х полюсный и по Мухину (три линии перпендикулярные мазку в его центре).
Лейкограмма крови здоровых животных, %
Нейтрофилы
Животные Б Э М Ю П С Л М
*) Псевдоэозинофилы.
Определение лейкоцитарного профиля.
Лейкоциты подсчитываются по классам на базе 100 клеток, выводится лейкоцитарная формула, после чего производится перерасчёт по количеству лейкоцитов в мм 3 .
Пример: если на 100 сосчитанных клеток приходится 60 лимфоцитов, а общее количество лейкоцитов в 1 мм 3 равно 10 000, то по формуле:
100-60 10 000 х 60
10 000- Х Х = 100 = 6 000
Затем пересчитываются другие классы.
Полученные данные отмечают точкой в соответствующей графе специального бланка.
Соединив точки линией, получают графическое изображение-лейкоцитарный профиль. Он даёт возможность определить какой лейкоцитоз у животного относительный или абсолютный.
Результаты исследования.
Показатели лейкоцитарной формулы и патологические
изменения лейкоцитов.
I.
Лейкоциты (тыс.\ мкл.):
палочкоядерные %;
сегментоядерные %;
лимфоциты %;
моноциты %;
клетки Тюрка %.
базофилы %;
эозинофилы %;
миелоциты %;
Патологические изменения:
анизоцитоз;
пойкилоцитоз;
Определение лейкоцитарного профиля.
Определение гематологического профиля
Заключение
Учебное оборудование, демонстрационный материал, животные:
Микроскоп
Счётная камера Горяева
Меланжеры для лейкоцитов
Шлифованное покровное стекло.
2-3 % раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовой синькой.
Пробирки лабораторные с резиновыми пробками
Пипетки градуированные на 1 и 5
Пипетки от гемометра Сали
Предметное стекло (чистые, обезжиренные)
Шлифованные стёкла
Краска Романовского-Гимза
Дистиллированная вода
Эмалированные ванночки
Иммерсионное масло
Таблицы с показателями лейкоцитарной формулы, лейкоцитарного и гематологического профиля.
VIII. Оценка работы студента преподавателем.
ЗАНЯТИЕ 20. Определение общего кальция и неорганического фосфора в сыворотке крови
Цель занятия-научиться определять в сыворотке крови количество кальция и неорганического фосфора и давать клиническую оценку результатам исследования.
Текущий опрос студентов по следующим вопросам:
Физиологическая роль кальция в организме животного.
Показатели общего кальция в сыворотке крови у различных видов сельскохозяйственных животных и их изменения.
Физиологическая роль фосфора в организме животных.
Показатели неорганического фосфора в сыворотке крови у сельскохозяйственных животных и их изменения
Объяснение методики выполнения работы преподавателем.
Выполнение работы студентами.
Определение кальция в сыворотке крови по методу де-Варда .
В одну маленькую центрифужную пробирку помещают 0,5 мл сыворотки крови, в другую-0,5 мл дистиллированной воды. Затем в каждую пробирку добавляют по 0,5 мл насыщенного водного раствора щавелевокислого аммония.
Через 30 минут пробирки центрифугируют в течение 15 минут. Сыворотку отсасывают, к осадку добавляют 1-2 мл дистиллированной воды и вновь центрифугируют 3-5 минут.
После этого жидкость отсасывают, к осадку приливают 0,3 мл серной кислоты в разведении 1: 2 с водой. Смесь нагревают на водяной бане до 50-65% и титруют сантинормальным раствором перманганата (КМпО4) до появления розового окрашивания, сохраняющегося в течение 2 минут.
Количество кальция в миллиграммах-процентах вычисляют по формуле: (а - к) х 2 х 0,2 х 100, где
а - количество сантинормального раствора перманганата, израсходованного на титрование сыворотки;
к - количество перманганата, израсходованного для контрольной титрации дистиллированной воды;
0,2 - количество кальция в миллиграммах, соответствующее 1 мл сантинормального раствора перманганата;
2 - множитель для вычисления количества кальция в 1 мл сыворотки крови;
100 - множитель для вычисления количества кальция в миллиграмм-процентах в 100 мл сыворотки крови.
Количество общего кальция (мг на 100 мл) у КРС 10,1-12,5; у лошадей-12,0-15,щ; у свиней-10,5-12,5; у птиц-11,0-15,0.
Определение неорганического фосфора в сыворотке крови
по Аммону и Гинсбергу (в модификации С.А. Ивановского).
В центрифужную пробирку вносят 3 мл дистиллированной воды, 1 мл исследуемой сыворотки и 1 мл 20 % раствора трихлоруксусной кислоты, хорошо смешивают. Через 5 минут центрифугируют при 3 000 об\мин. в течение 15 мин. (или фильтруют через бензольный фильтр). Затем в пробирку наливают 2,5 мл прозрачного центрифугата (или фильтрата), 0,5 молибденового реактива, 1 мл 1% раствора аскорбиновой кислоты и 6 мл дистиллированной воды. Одновременно в другую пробирку (стандарт) вносят 3 мл рабочего стандартного раствора фосфора, 0,5 мл молибденового реактива, 1 мл 1 % раствора аскорбиновой кислоты и 5,5 мл дистиллированной воды. Через 10 минут жидкости в обеих пробирках колориметрируют на фотоэлектроколориметре при зелёном светофильтре в кюветах шириной 10 мм.
Расчёт производят по формуле:
Ех х 0,05 х 100 Ех х 10
Х = Ек х 0,5 Ек, где
Х - количество неорганического фосфора в исследуемой сыворотке крови, мг в 100 мл;
Ех - оптическая плотность пробы с центрифугатом сыворотки;
Ек - оптическая плотность пробы со стандартным раствором фосфора (стандарт);
0,05 - количество фосфора во взятом для анализа объёме рабочего стандартного раствора фосфора, мг; 100-коэффициент для перечисления количества фосфора на 100 мл сыворотки крови.
В сыворотке крови взрослых животных в норме содержится следующее количество неорганического фосфора (мг на 100 мл); у КРС-5,0-6,5; у свиней-7,7-9,5; у лошадей-5,1-6,0; у птицы-5,6-8,0; у овец-4,5-7,5.
Результаты.
Количество кальция (мг %).
Количество неорганического фосфора (мг. %).
Заключение.
Учебное оборудование, демонстрационный материал.
Реактивы: насыщенный водный раствор щавелевокислого аммония,
сантинормальный раствор перманганата калия, серная кислота в разведении 1:2, 20 % раствор трихлоруксусной кислоты; молибденовый реактив (готовят смешиванием раствора, состоящего из 5 г молибдата аммония и 60 мл дистиллированной воды, с раствором, приготовленным из 15 мл концентрированной Н2 SO4 и 25 мл дистиллированной воды); 1% раствор аскорбиновой кислоты на 0,1 н растворе НСl; основной стандартный раствор фосфора (4,394 г КН 2 РО 4) высушенного до постоянной массы над НSO в эксикаторе и дистиллированной воды до 1 л); рабочий стандартный раствор фосфора (2 мл основного раствора и дистиллированной воды до 100 мл + 20 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты; в 3 мл раствора содержится 0,5мг фосфора; вода дистиллированная).
Фотоэлектроколориметр.
Сыворотка крови.
Водяная баня.
Термометр химический.
Центрифуга.
Пробирки.
Градуированные пипетки.
Бензольные фильтры.
Оценка работы студента преподавателем.
ЗАНЯТИЕ 21. Определение кислотной ёмкости и каротина в сыворотке крови
Место проведения занятия-лаборатория кафедры.
Цель занятия:
Овладеть методикой исследования кислотной ёмкости крови.
Научиться определять каротин в сыворотке крови и давать диагностическую оценку результатам анализов.
Текущий опрос студентов по следующим вопросам:
Что такое кислотная ёмкость и нормальные показатели кислотной ёмкости у различных видов сельскохозяйственных животных.
Виды нарушений кислотно-щелочного равновесия.
Физиологическая роль каротина, содержание его у животных в норме и при патологии.
Объяснение методики выполнения работы преподавателем.
Выполнение работы студентами.
Определение резервной щёлочности сыворотки крови
по И.П. Кондрахину.
Посуда: спаренные колбы, пипетки.
Реактивы:
0,01 н раствор NаОН (едкий натр);
5% раствор Н2SО4;
1 % спиртовой раствор фенолфталеина;
0,01 н раствор Н2SО4 (серной кислоты).
Ход исследования. В одну половину колбы вносят 0,5 мл сыворотки (или плазмы крови), причём выдувание остатков жидкости из пипетки не допускается, плотно закрывают пробкой. Во вторую половину колбы берут 2 мл 0,01 н раствора едкого натра и закрывают пробкой. Затем открывают первую половину колбы и к находящейся там сыворотке крови добавляют 1 мл 5 % раствора серной кислоты и быстро закрывают пробкой. Вращательными движениями тщательно смешивают сыворотку с кислотой. За время прохождения реакции смешивание повторяют 3-4 раза.
В контрольную пробирку вносят 2 мл 0,01 н раствора едкого натра и плотно закрывают пробкой. Во вторую половину спаренной колбы берут 1 мл 5% раствора серной кислоты и закрывают пробкой. Перед закрытием отверстий колбы пробки увлажняют дистиллированной водой.
Для большей точности каждый образец сыворотки исследуют в двух спаренных колбах. Контрольный опыт проводят в трёх сдвоенных колбах.
Через 4-6 ч (допустимо до 12 ч.) открывают колбы. В которых находится раствор едкого натра, вносят одну каплю 1 % спиртового раствора фенолфталеина. Смешивают (появляется красная окраска). Затем жидкость в колбе титруют 0,01 н раствором серной кислоты до полного обесцвечивания, что происходит при рН 8.Титрование следует проводить осторожно и с одинаковой быстротой во всех пробах и контроле.
Расчёт проводят по формуле:
Х = (а - 6) х 0,224 х 200 = (а - 6) х 44,8
где: Х-резервная щёлочность (в объёмных процентах) СО;
а-количество 0,01 н раствора серной кислоты, израсходованное на титрование опытной пробы, мл;
б-количество 0,01 н раствора серной кислоты, израсходованное на титрование опытной пробы, мл;
0,224-фактор пересчёта 0,01 н раствора серной кислоты на СО при данной реакции;
200-коэффициент для пересчёта взятого для анализа количества сыворотки (плазмы) крови (0,5 мл на 100 мл.)
Нормальные показатели кислотной емкости крови (мг в 100 мл); КРС-460-540, овцы-460-540, козы-380-520, лошади-500-600, свинья-500-600, собаки-450-550.
Определение каротина в сыворотке крови
(по В.Ф. Коромыслову и Л.А.Кудрявцевой)
В пробирку вносят 1 мл сыворотки крови и 3 мл 95 % этилового спирта, тщательно смешивают стеклянной палочкой, добавляют 6 мл петролейного эфира, энергично встряхивают в течение 2 минут и осторожно по стенке пробирки приливают 0,5 мл дистиллированной воды, оставляют стоять до чёткого разделения водной и органической фаз. После этого осторожно сливают 4,5 мл экстракта каротина и переносят в кювету.
Колориметрируют на фотоэлектроколориметре в кюветах 1см при синем светофильтре против петролейного эфира (бензина). Одновременно колориметрируют рабочий стандартный раствор бихромата калия (5 мл дистиллированной воды смешивают с 5 мл основного бихромата калия).
Расчёт делают по формуле: А
где: Х-количество каротина в сыворотке, мг на 100 мл;
А-оптическая плотность исследуемой пробы;
Б-оптическая плотность рабочего стандартного раствора
бихромата;
1,248-коэффициент для перечисления каротина в мг на 100 мл сыворотки крови.
Результаты исследования.
1. Показатели кислотной ёмкости сыворотки крови.
Заключение.
Сыворотка крови от различных животных
Фотоэлектроколориметр
Учебное оборудование, демонстрационный материал, животные.
0,5 % раствор химически чистого хлорида натрия, приготовленного на нейтральной бидистиллированной воде.
Сантинормальный раствор соляной кислоты.
Индикатор-1% водный раствор краски ализаринрот.
Петролейный эфир.
Рабочий стандартный раствор бихромата калия.
Вода дистиллированная
Пробирки
Всю используемую при анализах посуду для нейтрализации предварительно обрабатывают хромовой смесью.
VIII. Оценка работы студента преподавателем.
ЗАНЯТИЕ 22. Определение билирубина и общего белка
в сыворотке крови
Место проведения занятия-лаборатория кафедры.
Цель занятия-научиться определять в сыворотке крови билирубин, общий белок и давать клиническую оценку результатам исследования.
Текущий опрос студентов по следующим вопросам:
Значение исследования сыворотки крови на содержание в ней билирубина для дифференциации различных форм желтух.
Показатели общего белка сыворотки крови у здоровых животных и их изменения.
Объяснение методики выполнения работы преподавателем
Выполнение работы студентами.
Качественное определение билирубина в сыворотке крови
(по Ван-ден-Бергу)
Берут 2 маленькие пробки. В первую вносят 0,5 мл исследуемой сыворотки и добавляют 0,3 мл смеси диазореактивов; во вторую-0,5 сыворотки, 0,5 мл 96 0 спирта и 0,3 мл смеси диазореактивов (спирт во вторую пробирку добавляют для разрушения связи непрямого билирубина с глобулином крови).
Содержимое пробирки размешивают тонкой чистой палочкой. Розовое окрашивание в первой пробирке указывает на прямую, во второй пробирке-на непрямую реакцию.
Количественное определение (по Бокальчуку)
Для кратных разведений сыворотки берут 6 маленьких пробирок и наливают в каждую, за исключением первой, по 0,5 мл физиологического раствора поваренной соли, потом вносят по 0,5 мл исследуемой сыворотки в первую и вторую пробирки.
Сыворотку во второй пробирке тщательно смешивают с физиологическим раствором, после чего 0,5 мл смеси переносят в третью пробирку и также тщательно смешивают, 0,5 мл смеси из третьей пробирки переносят в четвёртую пробирку и т.д. Остаток (0,5 мл) из последней пробирки выливают в полоскательную чашку. В результате получают разведения:
№ пробирки 1 2 3 4 5 6
Степень разведения 1 2 4 8 16 32
Затем в каждую пробирку вносят по 0,5 мл абсолютного (или 96 град. спирта), встряхивают и получают взвесь белка в спиртовой вытяжке билирубина. В жидкость, помутневшую вследствие осаждения белка, наливают по 0,5 мл смеси диазореактивов, стеклянной палочкой осторожно перемешивают содержимое пробирок. В результате реакции сыворотка принимает розовое окрашивание. Концом реакции считают разведение, которое даёт едва различимое розовое окрашивание. Умножив степень разве
дения на 0,016, устанавливают количество билирубина в 1 мл сыворотки крови, а умножив её на 100--количество билирубина в миллиграмм % в 100 мл сыворотки. В первой пробирке это количество будет составлять 1,6 мг %, во второй-3,2, в третьей-6,4, в четвёртой-12,8, в пятой-25,6 и в шестой-51,2 мг %.
Определение билирубина в сыворотке крови (по Казакову)
Восемь чистых и сухих пробирок устанавливают в штативе. Затем в каждую пробирку вносят 0,5 мл исследуемой сыворотки и смешивают содержимое. Из этой пробирки при помощи пипетки набирают 0,5 мл смеси и переносят во вторую пробирку, из второй 0,5 мл жидкости переносят в третью и т.д. Из последней (восьмой) пробирки 0,5 мл смеси удаляют в сливательницу. Таким образом получают разведения сыворотки, кратные двум. Затем в каждую пробирку вносят по 1 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты и тщательно встряхивают. После этого содержимое пробирок выливают в приготовленные заранее воронки из фильтровальной бумаги, на которых должны быть обозначения в соответствии с разведением крови. Воронки оставляют для высушивания при комнатной температуре. Учёт реакции производят на следующий день. Концом реакции считают разведения, при котором остаётся на фильтре хорошо различимое зелёное окрашивание.
Для расчёта можно пользоваться таблицей.
№ пробирки Степень разведения Количество билирубина
в 100 мл сыворотки
Определение общего белка в сыворотке крови
рефрактометрическим методом
Показатель преломления лучей света (рефракция) является характерной величиной для различных веществ. Существует зависимость между концентрацией вещества (в данном случае-белков) и степенью рефракции, что и используется для определения белков в сыворотке крови.
Для обогревания призм через резиновые трубки пропускают воду для установления постоянное температуры + 20 0 . Перед работой откидывают верхнюю часть измерительной головки. На поверхность измерительной призмы стеклянной палочкой наносят одну каплю исследуемой сыворотки и осторожно закрывают головку.
Наблюдая в окуляр зрительной трубы и вращая маховичок слева, находят границу раздела света и тени. Маховичком справа устраняют цветную кайму. Затем маховичком слева точно совмещают границу раздела с перекрестием сетки и снимают отсчёт по шкале показателей преломления. Расчёт содержания белка в исследуемой сыворотке ведут по специальной таблице.
Коэффициенты преломления сыворотки крови и соответствующие им количества общего белка.
Показатели общего белка в сыворотке крови у здоровых животных (г на 100 мл); у КРС –6-8,5; у овец-6-7,5; у свиней-6,5-8,5; у лошадей-6,5-7,8; у собак-5,9-7,6; у кур-4,3-5,9.
Результаты исследования.
Количество билирубина (мг %)
Количество общего белка (г %)
Заключение.
Учебное оборудование, демонстрационный материал, животные.
1. Реактивы:
сульфаниловая кислота-1г; соляная кислота (уд. вес 1,19) - 10 г;
дистиллированная вода-200,0;
азотистокислый натрий-0,5 г, дистиллированная вода-100мл.
Перед исследованием готовят смесь из расчёта на 10 мл 1-го реактива 0,3 или 0,6 мл 2-го реактива.
Рефрактометр ИРФ-22
Полоскательные чашки
Глазные пипетки
Спирт-эфир
Сыворотка крови
Физиологический раствор поваренной соли.
96 0 спирт.
20% раствор трихлоруксусной кислоты
Фильтровальная бумага
Пробирки.
Градуированные пипетки
VIII. Оценка работы студента преподавателем.